SNP位點rs11175194影響卵巢癌預后的機制研究.pdf

1、目的：
　　卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在中西方均呈上升的趨勢，對女性生命健康造成了嚴重的威脅。SNP是單核苷酸多態(tài)性位點，其不同的堿基可以改變順勢作用元件的結構影響相應基因的表達。前期課題組在中國漢族女性上皮性卵巢癌患者中進行的GWAS研究發(fā)現(xiàn)了SNP位點rs11175194與上皮性卵巢癌的發(fā)病相關。Rs11175194位于基因SRGAP1的1號內(nèi)含子上，因此猜測其可能對 SRGAP1的轉錄具有一定的

2、調控作用，繼而通過改變SRGAP1的表達影響卵巢癌患者的發(fā)病和預后。因此本研究旨在探索SNP位點rs11175194的基因型是否影響SRGAP1的表達及對卵巢癌患者預后的影響，并且初步闡明SNP位點影響卵巢癌預后的分子機制。
　　方法：
　　本研究分析186例卵巢癌患者SNP位點rs11175194的基因型是否與卵巢癌患者的預后相關，然后用qRT-PCR的方法檢測64例與SNP位點基因型配對的卵巢癌患者組織中SRGAP1基因

3、mRNA的表達進行定量檢測，分析其表達與基因型是否具有相關性。通過生物信息學網(wǎng)站預測SNP位點所處位置的染色質結構以及SNP位點的生物學功能。按照SRGAP1表達的中位數(shù)分組，進行生存分析，研究SRGAP1的表達是否與卵巢癌患者的預后相關，同時利用TCGA數(shù)據(jù)庫中的卵巢癌患者信息進行驗證。構建熒光素酶報告基因載體和染色質免疫沉淀驗證SNP位點rs11175194的功能。為了研究SRGAP1對卵巢癌發(fā)生發(fā)生的影響，應用MTT實驗，Tran

4、swell小室實驗評價SRGAP1對卵巢癌細胞系增殖侵襲遷移能力的影響。并通過藥物敏感實驗，研究過表達 SRGAP1對化療藥物紫杉醇和表柔比星耐藥性的影響。
　　結果：
　　SNP位點rs11175194的基因型與SRGAP1的表達量相關，G基因型的表達量高于A基因型。SNP位點所處的位置染色質修飾主要是H3K27Ac，組蛋白這種修飾狀態(tài)是增強子的標志。通過Transfac預測發(fā)現(xiàn)NR1H4可以與SRGAP1上rs11175

5、194位點結合，通過TCGA數(shù)據(jù)庫，GEO數(shù)據(jù)庫和天津的表達數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)， NR1H4與SRGAP1的表達具有相關性，具有統(tǒng)計學意義（TCGA數(shù)據(jù)，r=0.154， p=0.002；GEO數(shù)據(jù)，r=0.393，p<0.05；天津數(shù)據(jù)r=0.467，p<0.05）。熒光素酶報告基因實驗證實SNP位點rs11175194的G基因型具有增強子作用，染色免疫沉淀實驗和測序證實了NR1H4可以與SRGAP1上rs11175194區(qū)域結合。按照SRGA

6、P1基因表達的中位數(shù)分組發(fā)現(xiàn)，高表達 SRGAP1的患者預后差，并且通過TCGA數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)驗證結果一致，（p<0.05）。功能學研究發(fā)現(xiàn)過表達SRGAP1可以促進卵巢癌細胞的增殖但是對遷移和侵襲的沒有影響，藥物敏感實驗發(fā)現(xiàn)過表達SRGAP1可以提高卵巢癌細胞系對化療藥物紫杉醇和表柔比星的抗性。
　　結論：
　　SNP位點rs11175194具有增強子功能，可以通過影響SRGAP1的表達影響卵巢癌患者的預后。SRGAP1高表達