利用大鼠原代心肌細胞研究HZFHG5α.pdf

1、心肌肥大的發(fā)病機制一直以來是心血管疾病研究領域的研究熱點之一，近年來對于心肌肥大的發(fā)生已取得很大的進展，但是其分子機制仍遠未闡明。因此，研究清楚心肌肥大發(fā)生的相關分子機制對闡明心臟病的發(fā)病機理、基因診斷并最終利用分子干預手段治療心臟病，都具有非常重要的意義。
　　心肌肥大是心肌細胞對高血壓、瓣膜病、急性心肌梗死及先天性心臟病等常見臨床疾病的一種基本應答。本實驗室前期工作已經從心臟cDNA文庫中克隆得到人類新基因HZFHG5a。通過

2、組織表達分析發(fā)現HZFHG5a主要在小鼠的腸、腎、肝、心臟中表達。免疫共沉淀結果證明了HZFHG5a能與TGF-β信號通路中的SMAD6/7發(fā)生相互作用。同時利用HZFHG5a基因過表達的穩(wěn)定細胞系發(fā)現HZFHG5a能夠部分抑制TGF-β信號通路中由TGF-β刺激所引起的SMAD2/3蛋白的磷酸化程度，進而抑制SMAD4蛋白的穿核過程。由此可見HZFHG5a很可能通過TGF-β信號通路參與調控心肌肥大的發(fā)生。
　　為了進一步研究H

3、ZFHG5a調控肥大的分子機制，我們首先在HEK293A細胞系中擴增了HZFHG5a腺病毒質粒。其次分離新生大鼠心肌細胞，使用腺病毒轉染心肌細胞，并利用RT-PCR和WesternBlot技術檢測了HZFHG5a的表達，以及經PE或10％FBS誘導后肥大標志基因ANF、β-MHC、SKA的表達。最后，我們在H9C2細胞系中轉染HZFHG5a質粒過表達HZFHG5a以及熒光報告質粒，檢測心臟發(fā)育相關基因的轉錄水平。結果表明，過表達HZFH