廣泛型線粒體肌酸激酶在肝癌分子診斷中的基礎與臨床研究.pdf

1、目的：通過檢測uMtCK在慢性乙肝患者、活動性肝硬化患者及原發(fā)性肝癌患者血清及病理組織中的表達情況，研究其與原發(fā)性肝癌臨床診斷的相關性；通過檢測 uMtCK在體外肝癌細胞系表達及檢測其與體外肝癌細胞增殖及凋亡的關系，為揭示其可能作為肝癌血清學標志物及潛在治療靶點的可行性提供理論和實踐基礎。
　　方法：應用 ELASA方法檢測 uMtCK在慢性乙肝患者、乙肝相關活動性肝硬化、原發(fā)性肝癌患者共50例血清中表達情況，明確uMtCK與肝癌

2、血清學診斷相關性；檢測 uMtCK在正常肝臟、乙型肝炎相關活動性肝硬化、原發(fā)性肝癌組織共160例病理芯片的表達，比較其在不同病理組織中表達差異；通過WestBlot檢測u MtCK在體外細胞系中的表達情況，運用MTT及流式細胞術檢測uMtCK與體外細胞增殖與凋亡的關系。
　　結果：
　　（1）50例患者（10例慢性乙肝患者、20例肝硬化患者、20例肝癌患者）血清中，20例肝癌患者uMtCK含量大于30U/L的有12例（60％

3、），顯著高于肝硬化及乙型肝炎組（p<0.05）。
　?。?）160例肝臟病理組織中（32例慢性乙肝患者，64例肝硬化患者，64例肝癌患者），慢性乙肝患者肝組織中uMtCK的陽性率為16.6%（5/32），其中有1例（3.1%）中強度染色（2+）；肝硬化組織中uMtCK的陽性率為46.9％（30/64），其中有3例（4.7%）中強度染色（2+）；肝癌組織中uMtCK的陽性率為65.7%（42/64），其中有6例（9.4%）中強度染色

4、（2+）。uMt CK在肝癌組織中表達量和強陽性（2+）比率高于活動性肝硬化組（p<0.05）。
　?。?） WesternBlot顯示uMtCK在肝癌細胞系HepG-2中表達量顯著增強；MTT法檢測顯示沒有轉染uMtCK的細胞的增殖受到抑制；轉染uMtCK的HepG-2細胞中24小時可顯示促增殖作用，Huh-7細胞中48小時顯示出uMtCK的促增殖作用；流式細胞術檢測uMtCK-pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)轉染

5、的HepG-2細胞系，結果顯示在轉染24小時后uMtCK組的早期凋亡細胞數（2.68%）小于空白組的早期凋亡數（3.12%），同樣經此法檢測uMtCK-pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)轉染的Huh-7細胞系，結果顯示在轉染48小時后 uMtCK組的早期凋亡細胞數（5.11%）小于空白組的早期凋亡數（5.68%）
　　結論：uMtCK在肝癌患者的血清及病理組織中均存在高表達的現象；uMtCK可促進體外肝癌細胞的增殖，抑