不同生長階段尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚ghr1和igf1的表達分析.pdf

1、動物生長受到生長軸的調控，生長激素受體(GHR)和胰島素樣生長因子1(IGF1)是生長軸中的重要組成成分，其基因表達水平與生長密切相關，是研究生長和生產(chǎn)性狀的候選基因，羅非魚（Oreochromis spp）是重要的世界性養(yǎng)殖魚類。本試驗開展為期200天的羅非魚生長對比試驗，并利用實時熒光定量PCR(real-time quantitative PCR，Q-PCR)技術對尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)和奧利亞羅

2、非魚（Oreochromis aureus）生長過程中肝臟和肌肉ghr1和igf1的表達水平進行了檢測，為進一步闡述羅非魚生長軸基因表達機制、利用分子手段對羅非魚進行選育等工作提供理論依據(jù)。
　　以β-actin為內參基因，建立了以SYBR Green染料為熒光指示劑的羅非魚ghr1和igf1的Q-PCR實驗平臺。實驗構建了含有ghr1，igf1和-actin特異性片段的標準質粒作為標準品，5倍梯度稀釋后以3次平行重復進行Q-PC

3、R擴增，根據(jù)所得到的標準曲線和Ct值計算三個基因的拷貝數(shù)，以-actin為看家基因校對，最終確定ghr1和igf1的相對表達量。結果表明:ghr1，igf1和β-actin標準曲線相關系數(shù)為0.999，0.993，0.998，線性和擴增效率良好;擴增產(chǎn)物熔解曲線平滑，為單一峰，沒有非特異性產(chǎn)物和引物二聚體生成;對尼羅羅非魚肝臟和肌肉組織進行初步檢測后發(fā)現(xiàn)，結果重復性好，數(shù)據(jù)處理簡單，結果可靠，能夠用于后續(xù)的實驗研究。
　　利用構建

4、好的Q-PCR實驗平臺跟蹤尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚在不同生長階段（0、20、40、60、80、125、145、165、185、205天）肝臟和肌肉ghr1，igf1表達的發(fā)育性變化。結果表明:實驗魚的體重增長可以分為快速生長期和平穩(wěn)期，在0～40天和145～165天時體重增長較快，40～145天時較緩。兩種羅非魚肝臟ghr1和igf1表達水平0～40天和145～165天時高于40～145天，表達情況與體重增長趨勢基本吻合，暗示尼羅羅非魚

5、和奧利亞羅非魚肝臟中ghr1和igf1的表達水平的差異是影響生長速度的重要原因之一。肌肉ghr1的表達規(guī)律與肝臟中類似，但滯后于肝臟ghr1的表達約1個采樣周期，提示ghr1表達有組織特異性。相比肝臟，兩種羅非魚肌肉中igf1 mRNA含量要低到2個數(shù)量級，且表達模式與肝臟ghr1和igf1、肌肉ghr1不同，提示肌肉igf1表達有其自身規(guī)律。尼羅羅非魚肌肉igf1總體呈上升趨勢，奧利亞羅非魚沒有明顯趨勢，二者表達模式不相同，兩種羅非魚