五味子多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其活性研究.pdf

1、五味子為木蘭科五味子(Schisandra chinensis(Turcz.) Baill）的干燥成熟果實(shí)，屬藥食兩用植物。研究表明，五味子多糖具有保護(hù)肝臟、抗腫瘤、抗氧化和抗衰老等藥理活性。五味子中含有木脂素、多糖、揮發(fā)油等多種活性成分，但目前對五味子的利用主要是木脂素，工業(yè)生產(chǎn)中醇提木脂素后的藥渣一般作為廢棄物丟棄，造成藥用資源的浪費(fèi)。而對于五味子多糖結(jié)構(gòu)研究少，且未見五味子多糖降血糖活性的具體報道。因此，本文以南、北五味子及醇提五

2、味子藥渣為原料，研究五味子多糖的提取工藝、純化技術(shù)、結(jié)構(gòu)表征及醇提五味子藥渣粗多糖的降血糖活性，主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1、研究五味子粗多糖的提取工藝和含量測定。根據(jù)單因素和正交試驗(yàn)，確定提取工藝條件為料液比1:14、溫度100℃、時間6h、提取2次，該工藝條件下多糖的得率為11.52％，多糖含量為44.46%;三因素對五味子多糖得率的影響次序?yàn)椋簻囟龋玖弦罕龋緯r間；按上述工藝對南、北五味子中性多糖進(jìn)行提取，得率和含量分

3、別為12.91%和19.67%，36.37%和40.09%;提取后的殘?jiān)?jīng)冷堿水浸提12h后，南、北五味子堿溶性多糖的得率和含量分別為1.4%和1.58%，19.27%和22.64%。
　　 2、研究五味子多糖的分離純化。南、北五味子及藥渣中性多糖和堿溶性多糖經(jīng)三氯乙酸脫蛋白，DEAE-52纖維素和葡聚糖凝膠柱層析分離得到的各組分多糖在HPLC圖譜上呈單一對稱峰，表明多糖各組分為均一多糖組分。經(jīng)測各組分的純度分別為：得到各組分多

4、糖計(jì)算得各組分多糖SCPP11、SCPP22和SCPP33的含量分別為分別為86.18%，79.18%，和39.26%，SSPP11、SSPP22和SSPP33的含量分別為91.19%，67.35%和38.65%，ESCPP11、ESCPP22和ESCPP33的含量分別為89.25%，82.20%和35.11%，三種堿提多糖組分ASCPP22、ASSPP22和AESCPP22的含量分別為80.49%，86.53%和92.55%。

5、　　 3、測定多糖各組分的分子量和單糖組成。采用高效液相色譜法和氣相色譜法測定各組分多糖的分子量和單糖組成，結(jié)果表明，SCPP11、SCPP22和SCPP33分子量分別為3450，143374和349382;SSPP11、SSPP22和SSPP33分子量分別為5281、131381和417656;ESCPP11、ESCPP22和ESCPP33分子量分別為4318、147791和371023;ASCPP22、ASSPP22和AESCPP

6、22分子量分別為53441、46693和50879。單糖組成結(jié)果為：CPP11由甘露糖，葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為甘露糖：葡萄糖：半乳糖=1：11.38：3.55;SCPP22是由鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，甘露糖，葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=3.04：1.21：1：2.91：100.67：11.37;SCPP33是由鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，甘露糖，葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為鼠李糖：

7、阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=1.34：1.35：1.62：1：1.41：7.17;SSPP11由甘露糖，葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為鼠李糖：葡萄糖：半乳糖=1：1.77：1.29;SSPP22是由鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，甘露糖，葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=3.89：1：1.12：2.99：5.37：10.54;SSPP33是由鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，甘露糖，葡萄糖和半乳糖組

8、成，其摩爾比為鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=12.53：1.45：1：2.66：3.34：10.95。
　　 4、表征多糖各組分的結(jié)構(gòu)。運(yùn)用IR、NMR等現(xiàn)代分析手段及高碘酸氧化、Smith、剛果紅等化學(xué)手段對各組分多糖進(jìn)行表征。IR結(jié)果表明，各組分多糖均具有多糖的特征吸收峰；NMR確定了各組分多糖結(jié)構(gòu)中即存在α糖苷鍵構(gòu)型，又存在β糖苷鍵構(gòu)型，SCPP22、SCPP33、SSPP22、SSPP33有糖醛酸結(jié)構(gòu)；

9、高碘酸氧化和Smith降解確定了各組分多糖的糖苷鍵類型及其比例；剛果紅實(shí)驗(yàn)證明，SCPP11、SCPP22、SSPP11和SSPP22可能具有三螺旋立體構(gòu)型，推測其可能為五味子多糖中具有較好活性的組分。
　　 5、初步研究五味子多糖的降血糖活性。采用四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型，分低、中、高三個劑量組給藥。結(jié)果表明，五味子多糖高、中、低三劑量組小鼠的血糖，與給藥前相比均有不同程度的下降，抑制率分別為14.23%、10.1%、4.6%

10、，具有一定的抑制效果和量效關(guān)系；降血脂結(jié)果表明，五味子多糖對糖尿病小鼠甘油三酯、高密度脂蛋白均具有一定的調(diào)節(jié)作用，能使糖尿病小鼠總膽固醇恢復(fù)到正常水平；肝糖原含量測定結(jié)果表明，五味子多糖高、中、低劑量對肝糖原的分解都有較好的抑制作用。本試驗(yàn)結(jié)果為降糖藥物或功能食品的研究開發(fā)提供了依據(jù)。
　　 6、五味子粗多糖的最大耐受量實(shí)驗(yàn)研究。采用一次最大限量給藥法對五味子多糖進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)研究。經(jīng)口給藥，劑量24g/kg，觀察期7d，此期