豬Tiki基因的初步研究及Tiki1基因打靶載體的構(gòu)建.pdf

1、本文對(duì)豬Tiki基因的表達(dá)進(jìn)行了初步的研究,并成功構(gòu)建了豬Tiki1基因置換型打靶載體。Tiki基因?yàn)楣鸫髮W(xué)兒童醫(yī)學(xué)院賀熹教授的實(shí)驗(yàn)室最新發(fā)現(xiàn)的基因,在Wnt信號(hào)通路中作為抑制因子而發(fā)揮作用。Tiki基因包括Tiki1和Tiki2兩種,其中Tiki1基因在嚙齒類動(dòng)物(如小鼠和大鼠)的體內(nèi)缺失。在蛙胚胎早期發(fā)育的過(guò)程中,Tiki1的原位雜交表明其分布在胚胎體軸的前端,暗示對(duì)于體軸前端結(jié)構(gòu)的發(fā)育起作用,而在蛙上進(jìn)行的功能研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Ti

2、ki1確實(shí)在頭部誘導(dǎo)的過(guò)程中起著決定性的作用,類似于Wnt信號(hào)通路中的另一抑制因子DKK-1。但由于小鼠體內(nèi)缺乏Tiki1基因的表達(dá),使用小鼠作為研究人類Tiki1基因缺失疾病模型的傳統(tǒng)途徑被阻斷,與人類在生理學(xué)、病理學(xué)上都極為相近的豬成為研究Tiki1功能的理想哺乳動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)用PCR的方法在成體豬的肝臟、肺、乳腺和卵巢四種器官中檢測(cè)到Tiki1基因的表達(dá),在心臟中檢測(cè)到了Tiki2基因的表達(dá)。從上述器官中獲取的Tiki1和Tik

3、i2部分cDNA片段測(cè)序結(jié)果與不同物種的比對(duì)顯示,我們獲取Tiki基因部分片段在不同物種中具有高度同源性(80％以上),說(shuō)明此基因高度保守,可能具有重要的功能。為了和Tiki基因在蛙和鼠上的表達(dá)模式做對(duì)比,對(duì)12-15天,即原條期到神經(jīng)溝階段的豬胚胎進(jìn)行了全胚胎原位雜交,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Tiki1基因在胚胎前端邊緣處表達(dá),說(shuō)明在豬的胚胎發(fā)育過(guò)程中Tiki1極有可能像在蛙上一樣,對(duì)頭部的誘導(dǎo)起著關(guān)鍵性的作用。在豬胚胎上進(jìn)行的Tiki2基因的原

4、位雜交結(jié)果和Tiki2在鼠胚胎上的原位雜交結(jié)果是一致的,均為沿著胚胎的中軸線縱向分布,且信號(hào)不強(qiáng),貌似在胚胎中的表達(dá)豐度也不及Tiki1基因。為了進(jìn)一步地證實(shí)豬Tiki1是否具有頭部誘導(dǎo)的功能,本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了豬Tiki1基因置換型打靶載體并進(jìn)行了初步的細(xì)胞篩選,以期在后續(xù)的研究中對(duì)Tiki基因在豬胚胎早期發(fā)育的過(guò)程中的作用做進(jìn)一步的探索?？傊?本文對(duì)豬Tiki基因的表達(dá)進(jìn)行了初步的研究,并成功地構(gòu)建了豬Tiki1基因置換型打靶載體。本