水蛭酶解提取物抑制脂多糖誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞ICAM-1、VCAM-1及MCP-1的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種發(fā)生在大動(dòng)脈血管壁上由慢性炎癥演變而來(lái)的脂代謝異常疾病[1]。血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)是動(dòng)脈血管壁的主要組成細(xì)胞之一,其參與了AS病變的形成,正常情況下VSMCs只存在于血管中膜,當(dāng)受到致AS因子刺激后,便會(huì)脫離血管中膜遷移至血管內(nèi)膜,并在內(nèi)膜下大量增殖[2]。單核細(xì)胞參與了AS斑塊形成過(guò)程中炎癥反應(yīng)的發(fā)生,不僅內(nèi)皮細(xì)胞(ECs)與單核細(xì)胞間存在相互作用,而且VSMCs亦通過(guò)分泌諸如細(xì)胞間粘附分子-1(IC

2、AM-1)、血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)及單核細(xì)胞趨化細(xì)胞因子-1(MCP-1)等細(xì)胞因子促進(jìn)單核細(xì)胞的招募與粘附[3-4]。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明,水蛭酶解提取物(HEE)作用于ApoE-/-小鼠后可以通過(guò)抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位減弱AS斑塊的形成[5],本實(shí)驗(yàn)采用脂多糖(LPS)炎癥細(xì)胞模型驗(yàn)證HEE對(duì)VSMCs粘附分子ICAM-1、VCAM-1和趨化因子MCP-1表達(dá)的影響。
  實(shí)驗(yàn)采用Ⅱ型膠原酶酶解法,從大鼠胸部主動(dòng)

3、脈獲得原代VSMCs,傷口愈合實(shí)驗(yàn)與Boyden小室結(jié)合熒光染料DiI實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)HEE對(duì)VSMCs遷移作用與粘附作用的影響。HEE對(duì)NF-κ B核轉(zhuǎn)位的影響用免疫熒光染色法測(cè)定,炎癥因子、粘附分子及趨化因子的表達(dá)同時(shí)用RT-PCR和Western-bloting測(cè)定。信號(hào)通路關(guān)鍵分子磷酸化與非磷酸化水平的檢測(cè)亦采用Western-bloting法。
  Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明200μg/ml的HEE抑制VSMCs遷移的能

4、力與陽(yáng)性藥物辛伐他汀(SIM)10μ M的抑制能力相當(dāng),抑制率均≥50%,Boyden小室研究結(jié)果表明200μg/mL的HEE也能抑制LPS誘導(dǎo)的VSMCs對(duì)THP-1及RAW264.7的趨化作用,抑制率分別為60%、80%,辛伐他汀的抗遷移能力介于HEE200μg/mL與400μg/mL之間。細(xì)胞粘附數(shù)目熒光計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,水蛭酶解提取物可顯著抑制THP-1、RAW264.7與VSMCs的粘附。NF-κB p65熒光免疫染色實(shí)驗(yàn)表明

5、,在VSMCs中100μ g/mL至400μg/mL的HEE可抑制LPS誘導(dǎo)的NF-κ B核轉(zhuǎn)位,且抑制效果隨HEE作用濃度的增加而逐步增強(qiáng)。RT-PCR和Western-bloting檢測(cè)結(jié)果顯示,在VSMCs中HEE不但能夠通過(guò)抑制p38MAPK的磷酸化在蛋白質(zhì)水平上降低LPS誘導(dǎo)的炎癥因子、趨化因子、粘附分子的表達(dá),而且能夠濃度依賴(lài)性的抑制上述三類(lèi)分子mRNA的表達(dá)。
  綜上研究所述,本實(shí)驗(yàn)室自主制備的水蛭酶解提取物可以顯

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