17β-雌二醇-miRNA-21信號(hào)通路抑制低氧性肺動(dòng)脈高壓肺血管重塑的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察分析雌激素17β-雌二醇（E2）干預(yù)的慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）大鼠肺動(dòng)脈中miRNA-21（miR-21）表達(dá)的變化，并進(jìn)一步探討E2是否通過(guò)下調(diào)miR-21的表達(dá)進(jìn)而影響肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）增殖。
　　方法：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：健康雌性SD大鼠32只

2、，行卵巢切除術(shù)后隨機(jī)分為4組：常氧組、常氧+E2組、低氧組、低氧+E2組，E2干預(yù)組每日予以E220ug/kg皮下注射，余組每日予以等體積生理鹽水皮下注射。低氧組、低氧+E2組置于低氧箱內(nèi)飼養(yǎng)；常氧組、常氧+E2組呼吸正?？諝?。4組置于同一室內(nèi)，相同食水飼養(yǎng)8周后，均測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓力（mean pulmonary artery pressure,mPAP）后處死，蘇木素-伊紅（HE）染色觀察各組大鼠肺小動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變并計(jì)算右心室肥厚指

3、數(shù)（right ventricule hypertrophy index,RVHI）；Real-time PCR法測(cè)各組肺動(dòng)脈中miR-21及增殖細(xì)胞核抗體（proliferation cell nuclear antibody,PCNA）mRNA表達(dá)水平，Western blot法檢測(cè)各組肺動(dòng)脈中PCNA蛋白的表達(dá)。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將體外培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（human pulmonary artery smooth m

4、uscle cells,hPASMCs）分為3組：常氧組、低氧組、低氧+E2組，培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞，四甲基偶氮唑藍(lán)比色法（MTT）檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況、Real-time PCR法測(cè)miR-21及PCNA mRNA表達(dá)情況，Western blot法測(cè)PCNA蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.E2減輕了低氧誘導(dǎo)的肺小動(dòng)脈重塑及肺動(dòng)脈壓力，并改善了右心肥厚程度。低氧組較常氧組mPAP、RVHI均明顯升高（P<0.01）；

5、常氧+E2組較常氧組無(wú)明顯變化（P>0.05）；低氧+E2組介于常氧組與低氧組之間水平（P<0.01）。
　　2.低氧上調(diào)了肺動(dòng)脈中miR-21的表達(dá)，這種上調(diào)可以被E2抑制。低氧組miR-21及PCNA表達(dá)較常氧組明顯上升（P<0.01）；常氧+E2組各指標(biāo)較常氧組無(wú)明顯變化（P>0.05）；低氧+E2組變化趨勢(shì)同低氧組，但變化程度較低氧組明顯減輕（P<0.01）。
　　3.低氧促進(jìn)了hPASMCs增殖，而E2可以抑制低氧

6、的作用。與常氧組相比，低氧組細(xì)胞明顯增殖（P<0.01），加入E2干預(yù)后增殖程度較單純低氧明顯減輕（P<0.01）。
　　4.低氧上調(diào)了hPASMCs中miR-21及PCNA的表達(dá)，E2可以改善這種上調(diào)程度。與常氧組相比，低氧組miR-21和PCNA表達(dá)明顯上升（P<0.01）；與低氧組相比，經(jīng)E2干預(yù)后miR-21和PCNA表達(dá)明顯下降（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　E2能夠改善HPH肺動(dòng)脈壓力、右心肥厚程度及肺