β-1,3-葡聚糖酶(BG2)基因遺傳轉化玉米自交系的研究.pdf

1、玉米是我國重要的糧食作物和飼料作物，在我國的糧食作物中占有重要地位，其產業(yè)發(fā)展對我國農業(yè)經濟具有重要的戰(zhàn)略意義。但是玉米真菌病害嚴重威脅我國玉米的生產，每年造成的損失難以估量，因此選育優(yōu)良的抗病玉米品種成為當務之急。常規(guī)抗病育種方法在玉米的品種改良、選育等方面發(fā)揮了重要作用，但存在選育年限長、耗資大、效率低及抗性種質資源匱乏等問題，近年來以導入目的基因創(chuàng)造新種質的基因工程手段的應用，為玉米抗真菌病育種的選育開辟了一條新途徑。
　　

2、 本試驗以玉米自交系昌7-2、鄭58、黑糯為試材，建立并優(yōu)化農桿菌介導玉米自交系的遺傳轉化體系，通過農桿菌介導法將抗真菌病基因β-1，3-葡聚糖酶（BG2）基因導入玉米自交系中，并探討了影響其遺傳轉化效率的主要因素，確定了玉米芽尖轉化法的最佳轉化條件，優(yōu)化了玉米幼胚轉化法，為培育玉米抗真菌病新品種奠定了基礎。研究的主要內容和結果如下:
　　 1、轉基因植株的獲得與其對應的篩選體系的選擇有關，本試驗所用的篩選抗生素為卡那霉素。經

3、過2次梯度試驗，試驗結果表明，在卡那霉素濃度為900mg/L獲得很好的篩選效果。但是由于在后期試驗中，發(fā)現抗性植株也受到了較大的傷害，造成其很容易死亡。因此，本試驗選擇卡那霉素濃度為800mg/L作為篩選濃度，在此濃度下對轉化植株進行篩選較為安全可靠。
　　 2、以昌7-2、鄭58、黑糯三個玉米自交系的芽尖為受體材料，詳細研究了影響農桿菌介導玉米芽尖轉化法的各種因素，建立了玉米芽尖遺傳轉化體系。研究結果表明:在侵染培養(yǎng)基加入乙酰

4、丁香酮濃度為60mg/L或者在傷口處滴加2μl濃度為150μmol/L的乙酰丁香酮能顯著提高轉化效率;菌液濃度(O)D600值為0.7，侵染培養(yǎng)基的pH值為5.2，浸染時間為11-12min，共培養(yǎng)時間為3d，共培養(yǎng)溫度為27℃時有利于抗性植株的產生。應用這個轉化體系，獲得了轉基因植株。PCR檢測表明，外源基因已經整合進玉米基因組中。這一體系的建立，為進一步將有用基因導入玉米優(yōu)良自交系奠定了基礎。
　　 3、玉米胚性愈傷組織是目