抗肝癌和肺癌細胞活性物質(zhì)的篩選及其作用機制的研究.pdf

1、目的：用MTT法對各種中藥樣品進行抗人肝癌HEPG2細胞和肺癌A549細胞活性篩選，并進行活性追蹤，篩選出活性較強的物質(zhì)，然后對其相關(guān)的抗腫瘤作用機制進行初步探究，從而對抗腫瘤藥物的研發(fā)提供可能的先導(dǎo)化合物和相關(guān)的實驗依據(jù)。
　　方法：通過MTT法用不同濃度的順鉑(20、40、60、80、100mg/mL)對人肝癌HEPG2細胞、人肺癌A549細胞進行細胞毒性檢測，算出不同濃度對應(yīng)的抑制率，從而獲得一個最合適的細胞毒性篩選濃度;以

2、順鉑為參照，在發(fā)現(xiàn)香加皮(XJP)和人參(RSY)提取物對這兩種細胞有抑制作用的基礎(chǔ)上，重點對分離純化XJP和RSY獲得的系列樣品進行活性追蹤，最終選出了兩種抗腫瘤活性較強的單體物質(zhì)(XJP-12、RSY-28);確定它們的結(jié)構(gòu)。用Hoechst染色法進行檢測XJP-12和RSY-28對HEPG2細胞和A549細胞的凋亡情況;采用Human TNF-α Elisa試劑盒和Caspase-8活性檢測試劑盒檢測XJP-12和RSY-28對H

3、EPG2和A549細胞中的TNF-α含量和Caspase-8活性。
　　結(jié)果：不同濃度的順鉑對人肝癌HEPG2細胞和A549細胞的增殖有明顯的抑制作用，對HEPG2和A549細胞的IC50分別為（15.81±1.24）mg/mL、(24.67±2.12)mg/mL，當(dāng)順鉑濃度為60mg/mL時，對兩種細胞的抑制率均達到了75％以上，以此濃度作為后續(xù)樣品篩選的初篩濃度;經(jīng)過活性追蹤，發(fā)現(xiàn)XJP-12、RSY-11、RSY-28對HE

4、PG2;XJP-12、RSY-25、RSY-28、RSY-30對A549細胞具有較強的抗腫瘤活性。其中XJP-12、RSY-28為單體物質(zhì)。它們分別是杠柳苷F和人參皂苷Rk1，其結(jié)構(gòu)式分別為：將其IC50折算為摩爾濃度后，杠柳苷F和人參皂苷Rk1對HEPG2細胞的IC50分別為13.5mM和12.1mM;對A549細胞的IC50分別為18.7mM和13.9mM，而同時兩次實驗測得的順鉑的IC50分別為52.6mM和82.2mM。通過Ho

5、echst染色發(fā)現(xiàn)XJP-12和RSY-28均能誘導(dǎo)細胞凋亡，且凋亡情況跟兩種藥物濃度相關(guān);而且XJP-12和RSY-28均能增加細胞內(nèi)TNF-α含量和提高Caspase-8酶活性，并存在一定的劑量關(guān)系。
　　結(jié)論：順鉑能有效的抑制HEPG2和A549細胞的增殖，且存在一定的劑量關(guān)系，可作為本次篩選的陽性對照。從香加皮和人參中篩選獲得了兩個對這兩種細胞具有細胞毒作用的化合物杠柳苷F和人參皂苷Rk1。這兩個化合物對這兩種腫瘤細胞的細