肥胖與體重正常女性皮下脂肪組織差異microRNA的分析.pdf

1、目的:肥胖發(fā)病率日益升高，給全社會帶來沉重的醫(yī)療負擔。microRNA（miRNA）是一組保守的非編碼小RNA，可以在轉錄后水平對靶基因發(fā)揮負性調控作用。本文旨在研究肥胖、正常體重女性皮下脂肪組織miRNA的表達差異，探究miRNA調節(jié)肥胖發(fā)生發(fā)展的機制。
　　方法:納入3名肥胖女性和5名體重正常女性，中位年齡分別為40(30-56)歲和49(37-51)歲，完善臨床資料、生化指標測定。取腹部皮下脂肪組織，抽提包含miRNA在內的

2、總RNA，與Affymetrix miRNA4.0芯片雜交，并進行差異miRNA的篩選和聚類分析。利用軟件miRanda和Targetscan預測差異miRNA的靶基因，利用GO數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對靶基因進行顯著性功能分析和顯著性信號通路分析。將所納入的樣本擴增為8名肥胖女性和9名體重正常女性，平均年齡分別為34.88±9.67歲和42.11±6.68歲，采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)方法對部分差異miRNA進行驗證，并在

3、信使RNA(mRNA)的層面檢測部分靶基因在兩組間的表達。
　　結果:肥胖女性體質指數(shù)(BMI)、體重、腰圍顯著高于體重正常對照(P＜0.05)。皮下脂肪組織miRNA芯片提示:與體重正常女性相比，肥胖女性皮下脂肪組織中共有58種miRNA出現(xiàn)了4倍以上的差異表達，其中，54種miRNA表達下調，4種miRNA表達上調（倍數(shù)＞4，P＜0.01，F(xiàn)DR＜0.05）。針對差異miRNA，采用兩種不同的靶基因預測軟件——miRanda和

4、Targetscan預測出交集靶基因1333個。這些靶基因使269個功能和89條信號通路發(fā)生了顯著性改變(P＜0.001，F(xiàn)DR＜0.05)。其中，顯著性改變程度較高的生物學功能包括:DNA的轉錄及其調控，細胞粘附，小分子物質代謝等。顯著性改變程度較高的信號通路包括:MAPK通路、癌癥相關通路、PI3K-Akt通路等。進一步，采用qRT-PCR的方法證實miR-143-3p，miR-143-5p，miR-145-5p和let-7a-5p

5、在肥胖女性皮下脂肪組織中顯著下調，表達量分別為體重正常對照的68％(P=0.046)、61％(P=0.016)、73％(P=0.042)、66％(P=0.006)，與miRNA基因芯片的檢測結果一致。更進一步，對上述差異miRNA預測所得的靶基因，包括高遷移率族蛋白A2(HMGA2)，Thy1細胞表面抗原(THY1)、Tar DNA結合蛋白(TARDBP)、銜接因子蛋白含pH域磷酸酪氨酸結合域和亮氨酸拉鏈基元1(APPL1)、脂肪酸轉運

6、蛋白-1(FATP1)、葡萄糖磷酸變位酶3(PGM3)的mRNA水平進行了研究，結果發(fā)現(xiàn)let-7a-5p調控的靶基因HMGA2在肥胖女性皮下脂肪組織中表達明顯增加，是體重正常女性的3.19倍(P=0.025)。
　　結論:肥胖女性的皮下脂肪組織中58種miRNA出現(xiàn)了4倍以上的差異表達，其中，93％(54/58)的差異miRNA表達下調，7％(4/58)的差異miRNA表達上調，這些差異miRNA預測調節(jié)的靶基因主要參與DNA的