漢本泊芬的臨床前藥代動力學研究.pdf

1、腫瘤光動力治療藥漢本泊芬是有前途的新型光敏劑，具有結構明確、純度高、光敏化力作用強以及對腫瘤組織殺傷力強等優(yōu)勢。漢本泊芬的環(huán)狀四吡咯結構使其具有較強的紫外吸收，因此本課題建立了 HPLC-UV方法，并研究了漢本泊芬的臨床前藥代動力學，對今后的臨床研究具有重要意義。
　　一、生物樣品中漢本泊芬分析方法的建立
　　本實驗建立和驗證了HPLC法分析和測定生物樣品中漢本泊芬的濃度。色譜分析采用DiamonsilC18(2)(5mm，

2、100×4.6mm)色譜柱，以甲醇、醋酸銨水溶液及不同比例的冰醋酸為流動相，400nm作為紫外檢測波長。生物樣品中其他物質(zhì)不干擾樣品測定。方法學驗證結果表明，在各自的標曲范圍內(nèi)，r2＞0.996，說明線性良好。各分析方法的日內(nèi)精密度以RSD表示，均在1.24～10.90％范圍內(nèi)，日間精密度(RSD)為1.34～6.88％，準確度為82.76～114.20％。該方法成功用于漢本泊芬的SD大鼠和Beagle犬的藥代動力學研究。
　　二

3、、漢本泊芬在SD大鼠體內(nèi)的臨床前藥代動力學研究
　　SD大鼠單劑量(0.5、1和2mg/kg)靜注給藥漢本泊芬粉針劑后，按照實驗方案設計的不同時間點取血，用已建立的HPLC法測定漢本泊芬在SD大鼠體內(nèi)的血藥濃度，繪制血漿藥物濃度一時間曲線。藥物動力學參數(shù)依據(jù)非房室模型推算而得。經(jīng)非房室模型法估算的SD大鼠單劑量靜注漢本泊芬粉針劑低、中、高三個劑量組后達峰濃度Cmax分別為:11526.02±1619.60、22439.22±245

4、6.47、49194.70±3681.64 ng/mL; AUC0～72分別126454.05±69247.20、468230.68±126316.13、518282.36±254975.92 ng·h/mL。結果表明，單劑量靜注漢本泊芬粉針劑后SD大鼠體內(nèi)血藥濃度以較慢的速度消除，且沒有顯示出個體差異。AUC0～72、Cmax與給藥劑量基本呈正相關，相關系數(shù)r2分別為0.5441、0.9737，符合線性藥代動力學特征。
　　每天

5、給藥一次的多劑量試驗，第四天起體內(nèi)漢本泊芬的濃度基本上達到穩(wěn)態(tài)，通過分析對比單劑量和多劑量給藥的藥代動力學參數(shù)可以看出，連續(xù)給藥七天后漢本泊芬在SD大鼠體內(nèi)有輕微蓄積。
　　三、漢本泊芬對SD大鼠的組織分布研究
　　SD大鼠單劑量尾靜脈注射1mg/kg漢本泊芬粉針劑后，本實驗設定30min、2h、4h、8h、24h、48h等時間點處死，在給藥前和給藥后不同時間點取心、肝、脾、肺、腎、胃、腦、皮膚、脂肪、肌肉、腸、睪丸、卵巢、

6、子宮等組織，用生理鹽水清洗干凈后用濾紙吸干，將處理好的組織樣品避光低溫（-80℃）保存待測。測定時，按組織樣品前處理方法處理，采用HPLC-UV法測定各組織藥物濃度。實驗結果表明，漢本泊芬在肺、卵巢、心中濃度最高，肝、腎、脾、子宮、睪丸次之，胃、腸很少，腦、脂肪、皮膚、肌肉中極少且含量低于定量下限。
　　四、漢本泊芬在Beagle犬體內(nèi)的臨床前藥代動力學研究
　　Beagle犬五個單劑量組(0.3 mg/kg、0.6 mg/

7、kg、1.2 mg/kg、2.4 mg/kg和4.8mg/kg)分別左前肢靜注漢本泊芬粉針劑適量后，按照實驗方案中設定的時間點取血。用已建立的HPLC法測定漢本泊芬在Beagle犬體內(nèi)的血藥濃度，繪制血漿藥物濃度一時間曲線。藥物動力學參數(shù)依據(jù)非房室模型推算而得。經(jīng)非房室模型法估算的Beagle犬單劑量靜注給藥漢本泊芬粉針劑以上五個劑量組后達峰濃度Cmax分別為:1637.64±702.16、4061.22±469.85、9491.22±

8、1217.44、22693.25±1450.23和47316.47±2827.02ng/mL;AUC0～6分別為121.51±54.69、220.49±47.97、1114.03±222.42、2285.16±327.47和7517.85±2137.48ng.h/mL。結果表明，Beagle犬單劑量靜注給藥漢本泊芬后體內(nèi)血藥濃度消除較快，基本無個體差異;AUC0～6、Cmax與給藥劑量基本呈正相關，符合線性藥代動力學特征，相關系數(shù)r2分

9、別為0.8787、0.9919。Beagle犬多劑量靜注給藥漢本泊芬1.2mg/kg后第四、五、六、七日漢本泊芬的谷濃度均低于檢測的最低定量限。多劑量結果顯示不產(chǎn)生蓄積效應。
　　五、漢本泊芬在人、鼠、犬不同種屬的血漿蛋白結合率研究
　　本試驗采用HPLC法測定血漿中藥物總濃度及游離藥物濃度，應用平衡透析法測定蛋白結合率。實驗結果顯示，漢本泊芬的人、Beagle犬和SD大鼠在低中高三個濃度(2.5μg/mL、10μg/mL和