小鼠肝臟中絲氨酸、蘇氨酸和賴氨酸乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、蛋白質(zhì)中氨基酸的乙?；揎検且环N可逆的在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中都能發(fā)生的翻譯后修飾形式,參與調(diào)控多種生物學(xué)過程,如DNA-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)相互作用、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、細(xì)胞的遷移和分化等。自1968年Vidali發(fā)現(xiàn)了第一個乙酰化蛋白質(zhì)以來,科學(xué)家對氨基酸的乙?；揎椷M(jìn)行了大量的研究,研究重點(diǎn)主要集中于賴氨酸殘基的乙?；揎?已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了300多個賴氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì),然而,相比生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)而言,發(fā)現(xiàn)的乙酰化蛋白質(zhì)

2、仍然只是冰山一角,賴氨酸乙酰化底物的缺乏已經(jīng)成了研究賴氨酸乙?；揎椀钠款i,限制了與賴氨酸乙酰化修飾相關(guān)的生物學(xué)功能的研究。近年來,蛋白質(zhì)組學(xué)的方法已被作為一種高通量的有效的方法用于研究蛋白質(zhì)及其翻譯后修飾形式。用HPLC分離免疫親和純化得到乙?；鞍踪|(zhì)或肽段,然后用MS/MS進(jìn)行鑒定,是一個理想的研究賴氨酸乙?；揎椀姆椒ā?br>　　 除了賴氨酸殘基的乙?；揎?2006年Orth等人在研究耶爾森菌屬中的細(xì)菌毒力因子YopJ(Ye

3、rsiniaspecieseffectorprotein)時(shí),發(fā)現(xiàn)YopJ是一種乙?；D(zhuǎn)移酶,能夠使mitogen-activatedproteinkinasekinases(MAPKK)中的絲氨酸和蘇氨酸殘基發(fā)生乙?；揎棥０l(fā)生乙?；揎椀慕z氨酸和蘇氨酸殘基位于MAPKK的活性鏈上,這兩個位點(diǎn)發(fā)生乙酰化修飾后,同樣的位點(diǎn)上便不能發(fā)生磷酸化修飾,從而無法激活mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)信號通路

4、,抑制免疫應(yīng)答。因此,絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椌哂兄匾纳飳W(xué)功能。目前研究絲氨酸和蘇氨酸乙?；揎椀姆椒ㄓ邢?由于難以得到絲氨酸、蘇氨酸乙酰化修飾的抗體,運(yùn)用免疫親和純化技術(shù)預(yù)先分離和富集絲氨酸和蘇氨酸乙?；鞍谆螂亩蔚姆椒〞簳r(shí)難以實(shí)現(xiàn)。
　　 針對目前乙?；揎椦芯康默F(xiàn)狀及存在的問題,本論文從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度對小鼠肝臟中的絲氨酸、蘇氨酸和賴氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行了研究,共包括以下四部分內(nèi)容:
　　 第一章前言

5、部分概述了目前蛋白質(zhì)組學(xué)和翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的研究現(xiàn)狀,尤其對蛋白質(zhì)乙?；揎椀难芯窟M(jìn)展做了很好的綜述,說明了本論文的選題目的及意義。
　　 第二章運(yùn)用shotgun技術(shù)對小鼠肝臟中的絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行分析,這是首次運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椷M(jìn)行分析。共在60個乙?；鞍踪|(zhì)中鑒定到63個乙酰化位點(diǎn),其中包括絲氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)30個,共33個位點(diǎn);蘇氨酸乙?；鞍踪|(zhì)22個,共2

6、2個位點(diǎn)。這些絲氨酸和蘇氨酸乙?；鞍踪|(zhì)均為首次發(fā)現(xiàn)可以發(fā)生絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙酰化修飾。借助生物信息學(xué)工具對這些乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行功能分析、氨基酸序列進(jìn)行分析等。挑選具有重要生物學(xué)功能的乙?；鞍踪|(zhì)進(jìn)行克隆表達(dá),證明絲氨酸、蘇氨酸的乙?；揎椩谏矬w內(nèi)的存在。我們的發(fā)現(xiàn)表明與賴氨酸殘基的乙?；揎椧粯?絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椏赡苁切∈蟾闻K中廣泛存在的翻譯后修飾形式,具有潛在的重要的生物學(xué)功能。
　　 第三章運(yùn)用免疫

7、親和純化技術(shù)結(jié)合nano-HPLC/MS/MS技術(shù),對小鼠肝臟中的賴氨酸殘基乙酰化修飾肽段進(jìn)行富集、鑒定,并對鑒定到的賴氨酸乙酰化修飾蛋白質(zhì)進(jìn)行了功能分析、氨基酸序列分析。共在20個賴氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)中鑒定到21個賴氨酸乙?；揎椢稽c(diǎn),其中12個蛋白質(zhì)和16個位點(diǎn)為首次被鑒定到可以發(fā)生乙?；揎?。另外,發(fā)現(xiàn)了三個能夠發(fā)生乙?；揎椀囊阴；D(zhuǎn)移酶,對于進(jìn)一步研究賴氨酸的乙?；揎椩诙喾N細(xì)胞過程中的生物學(xué)功能有重要意義。