鳙魚(yú)性別特異片段的篩選和克隆.pdf

1、關(guān)于動(dòng)物性別的研究一直深受人們的關(guān)注,以哺乳動(dòng)物為代表已取得了許多可喜的成果。魚(yú)類(lèi)在脊椎動(dòng)物進(jìn)化系統(tǒng)中處于處于承前啟后的地位,具有很豐富的生物學(xué)特征以及重大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,是在脊椎動(dòng)物中種類(lèi)最多,分布又最廣的類(lèi)群,因此,對(duì)魚(yú)類(lèi)性別決定機(jī)制的研究具有重要的意義。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的魚(yú)類(lèi)的性染色體類(lèi)型只占很小的比例,其性染色體和常染色體很難進(jìn)行區(qū)分在外形上,是因?yàn)轸~(yú)類(lèi)的性染色體處于動(dòng)物染色體進(jìn)化的原始狀態(tài)。利用傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)很難檢測(cè)到在魚(yú)類(lèi)中雌

2、雄個(gè)體基因組水平上的差異,但是隨著生物分子學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,把分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于尋找魚(yú)類(lèi)性別特異片段的成功事例不斷出現(xiàn),為鑒定魚(yú)類(lèi)的遺傳性別奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究以鳙魚(yú)為實(shí)驗(yàn)材料,利用RAPD指紋分析和ISSR掃描及Southern雜交技術(shù)對(duì)其開(kāi)展了一系列分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究。鳙魚(yú)[Aristichthys nobilis(Richardson)]屬于鯉形目,鯉科,鰱亞科,鳙屬。我國(guó)各大水系均有此魚(yú),分布于亞洲東部,以長(zhǎng)江流域

3、中、下游地區(qū)為主要產(chǎn)地。我國(guó)淡水養(yǎng)殖業(yè)中的“四大家魚(yú)”之一,是我國(guó)重要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi),在我國(guó)鯉科魚(yú)類(lèi)中具有很重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究是首次利用分子標(biāo)記尋找鳙魚(yú)的性別特異片段。
　　 本研究利用采自河南省水產(chǎn)研究院詹店養(yǎng)殖基地的鳙魚(yú)為材料,選擇420條長(zhǎng)10bp的隨機(jī)引物和77條ISSR引物分別對(duì)鳙魚(yú)不同性別的DNA池和不同個(gè)體的基因組DNA進(jìn)行RAPD指紋分析和ISSR掃描。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在隨機(jī)引物S1269和ISSR引物ISSR-65擴(kuò)增中

4、雌性個(gè)體都出現(xiàn)了一條特異片段,經(jīng)克隆和堿基測(cè)序后,發(fā)現(xiàn)該片段長(zhǎng)600bp和754bp。根據(jù)該片段堿基序列分別設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物,以雌雄個(gè)體基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,管家基因β-actin作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨機(jī)引物S1269在雌雄個(gè)體中都有,只有ISSR引物ISSR-65在雌性個(gè)體中出現(xiàn)特異擴(kuò)增產(chǎn)物。利用地高辛對(duì)該片段進(jìn)行標(biāo)記作為探針,斑點(diǎn)雜交和Southern雜交顯示,陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)于雌性個(gè)體中,而在雄性個(gè)體中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何雜交