PERK-eIF2a通路相關(guān)因子在間歇低氧大鼠肺組織中的表達及依達拉奉的干預(yù)對表達的影響.pdf

1、目的：通過建立間歇低氧大鼠模型，探討PERK/eIF2a通路相關(guān)因子p-PERK、CHOP在不同時間間歇低氧大鼠肺組織中的表達以及依達拉奉的干預(yù)對p-PERK、CHOP表達的影響。
　　方法:成年雄性 Wistar大鼠90只，按隨機數(shù)字法分成對照組（UC組）、間歇低氧組（IH組）及依達拉奉組（ED組）。每組再各自分成3d、7d、14d、21d、28d五個時間亞組，每個時間亞組取6只大鼠作為實驗對象。每天于同一時間點，將ED組大鼠經(jīng)

2、尾靜脈注射依達拉奉注射液（3mg/Kg），30min后與 IH組大鼠一同放置于有機玻璃飼養(yǎng)箱內(nèi)。首先給予氮氣持續(xù)至低氧狀態(tài)（控制氧濃度低至5％）30s，然后充入空氣40s使氧濃度恢復(fù)21%，繼續(xù)注入空氣50s，維持氧濃度在21%。以上為一個循環(huán)周期，時間為2min，使低氧箱內(nèi)氧濃度在5%~21%之間形成周期性交替，造成間歇低氧條件；將 UC組每日于相同時間置于與 IH組相同的有機玻璃飼養(yǎng)箱內(nèi)，持續(xù)注入空氣2min，氧氣濃度維持在21%。

3、按設(shè)計好時間點處死大鼠，開胸暴露心臟和雙肺。室溫肝素生理鹽水經(jīng)左升主動脈快速將心臟血液沖洗干凈，取出雙肺，再次用生理鹽水沖洗兩遍后,將左側(cè)肺浸入4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片，用于 HE染色、免疫組化法染色；將右側(cè)肺組織保存于-80℃冰箱，用于RT-PCR檢測CHOP mRNA。HE染色法觀察比較UC組、IH組及ED組大鼠肺組織病理形態(tài)變化；免疫組化法檢測 p-PERK、CHOP蛋白表達；采用RT-PCR方法檢測三組大鼠肺組織CHO

4、P mRNA表達量。
　　結(jié)果:1、采用HE染色法在光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠肺組織形態(tài)改變：UC組大鼠肺組織形態(tài)未見明顯變化。與UC組比較，IH組及 ED組均隨間歇低氧時間的延長逐漸出現(xiàn)肺組織水腫，肺泡間隔增寬，部分肺泡融合成較大的含氣囊腔，肺泡腔可見出血和蛋白滲出物，毛細(xì)血管床可見炎性細(xì)胞浸潤等病理改變，與 IH組比較，ED組大鼠肺組織病理形態(tài)改變較輕。2、免疫組化法檢測各組大鼠肺組織中p-PERK、CHOP蛋白的表達：UC組各

5、時間點 p-PERK、CHOP蛋白的表達均未見明顯變化；與 UC組比較，IH組及 ED組于3d、7d、14d、21d、28d各時間點 p-PERK、CHOP蛋白的表達均明顯增高（P＜0.05)，且隨間歇低氧時間的延長，表達呈現(xiàn)逐漸增高趨勢，與 IH組比較，ED組各時間點大鼠肺組織中 p-PERK、CHOP蛋白的表達均降低（P＜0.05)。3、RT-PCR法檢測各組 CHOP mRNA的含量：UC組各時間點比較 CHOP mRNA含量未見

6、明顯變化；與 UC組比較，IH組與ED組均于3d、7d、14d、21d、28d各時間點CHOP mRNA的表達明顯增高（P＜0.05)，且隨間歇低氧時間的延長，CHOP mRNA的表達呈現(xiàn)逐漸增高趨勢；與IH組比較，ED組大鼠肺組織各時間點 CHOP mRNA的表達均降低（P＜0.05)。4、相關(guān)性分析：p-PERK與 CHOP蛋白的表達存在正相關(guān)（r=0.837，P＜0.01具有統(tǒng)計學(xué)意義）。
　　結(jié)論:1、間歇低氧造成大鼠肺組