豬Ghrelin基因的克隆、原核表達及Ghrelin蛋白多克隆抗體的制備研究.pdf_第1頁
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1、分類號:密級:豬Ghrelin基因的克隆、原核表達及Ghrelin蛋白多克隆抗體的制備研究Stu即ofeloningofGhrelingene，ProkaryoticexPressionandPreParationofPolyclonalantibo勿0ofGhrelinProteininswine研究生:劉洪Candidate:HongLiu導師:李家奎SuPervisor:JiaKuiLi研究方向:動物營養(yǎng)代謝病Field:Anim

2、alDISeaseofNutritionandMetabolism華中農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院二00八年六月豬Ghrehn基因的克隆、原核表達及Ghrehn蛋白多克隆抗體的制備研究2.5.DNA瓊脂糖凝膠電泳……112.6.DNA片段的回收..........……H3.DNA片段的連接……123.1.連接酶連接DNA片段，……123.2載體DNA的酶切反應……123.3目的基因與質(zhì)粒載體的連接反應，……123.4.感受態(tài)的制備……134.質(zhì)粒

3、的轉化……134.1質(zhì)粒的小量提取................……134.2克隆載體的鑒定，，，................……134.3.序列測定，……145.pGhrelin原核表達質(zhì)粒的構建……145.1.pGhrelin在大腸桿菌BLZ中的表達……145.2.表達產(chǎn)物的聚丙烯酞胺凝膠電泳檢測，，……145.2.1.SDS聚丙烯酞胺凝膠的配制……145.2.2蛋白質(zhì)樣品的上樣前處理及電泳……145.2.3凝膠的染色與脫色…

4、…巧結果……151.豬胃總RNA的提取結果，，，，，……152.pGhrelincDNA片段的Rl’pcR擴增結果，……163.pGhrelin克隆載體的構建，……163.1PCR產(chǎn)物克隆，……163.2.克隆質(zhì)粒的酶切鑒定，........……163.3克隆質(zhì)粒的PCR鑒定....................……164.表達載體與目的基因的連接與轉化，……174.1質(zhì)粒酶切鑒定，……174.2質(zhì)粒PCR鑒定，一175.重組基因的誘

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