氧化型高密度脂蛋白對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)是血漿中重要的抗動(dòng)脈粥樣硬化物質(zhì)。但在系統(tǒng)性炎癥(包括動(dòng)脈粥樣硬化)中,高密度脂蛋白可發(fā)生氧化修飾,形成氧化型高密度脂蛋白(oxidized high-density lipoprotein,ox-HDL)。ox-HDL失去了心血管保護(hù)作用,甚至成為促炎和促動(dòng)脈粥樣硬化的因子。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中,血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth mus

2、cle cells,VSMCs)增殖和遷移起著重要的作用。然而,氧化型高密度脂蛋白對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的影響及其相關(guān)機(jī)制目前仍知之甚少。
　　方法:采用超速離心法分離新鮮血漿樣品中的HDL,并在體外由硫酸銅(CuSO4)介導(dǎo)氧化修飾而形成ox-HDL。大鼠主動(dòng)脈VSMCs在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下分離與培養(yǎng)。在多次實(shí)驗(yàn)研究及分析中,未予特殊處理(氧化修飾)的正常HDL,即天然型高密度脂蛋白(native high-density lip

3、oprotein,N-HDL),和ox-HDL分別以不同的濃度和時(shí)間間隔處理VSMCs。細(xì)胞增殖由CCK-8(Cell counting kit-8)試劑盒來測定,細(xì)胞遷移由transwell小室和劃痕實(shí)驗(yàn)來評(píng)估,而胞內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)由活性氧檢探針,即雙氫乙酰乙酸一二氯熒光黃(dihydrochloride acetyl acid dichloride fluorescent yell

4、ow,DCFH-DA)來測定。
　　結(jié)果:N-HDL對(duì)于VSMCs的增殖和遷移無作用;然而,ox-HDL卻明顯地以劑量依賴性方式促進(jìn)VSMCs的增殖和遷移。此外,我們發(fā)現(xiàn)ox-HDL明顯地以時(shí)間依賴性方式促進(jìn)VSMCs胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,而N-HDL卻無此作用。N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)為一種ROS清除劑,它能夠有效的抑制由ox-HDL誘導(dǎo)的VSMCs胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,進(jìn)而抑制ox-HDL的促增殖