雞白痢沙門氏菌部分基因的必需性鑒定.pdf

1、雞白痢和鼠傷寒沙門氏菌均為沙門氏菌屬成員，但二者有著明顯的宿主嗜性和致病性差異，前者為僅感染雞的專嗜性沙門氏菌，致死率高，對養(yǎng)禽業(yè)的危害極大;而后者可感染人和多種動物，是重要的人畜共患病原。目前對廣嗜性沙門氏菌的研究較為廣泛和深入，但對專嗜性的雞白痢沙門氏菌研究相對較少。本實(shí)驗(yàn)對照鼠傷寒沙門氏菌的110個必需基因，運(yùn)用插入復(fù)制突變法(IDM)的方法對雞白痢沙門氏菌中的對應(yīng)基因的必需性進(jìn)行了初步的鑒定在KnuthK等鑒定出的257個鼠傷寒

2、沙門氏菌必需基因中，除去本實(shí)驗(yàn)室林蕾已鑒定完成的109個及部分有關(guān)rRNA、tRNA功能的必需基因，我們從余下基因中選取110個作為本研究的目的基因。從NCBI上獲取目的基因序列并設(shè)計引物，以雞白痢沙門氏菌基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片段的大小集中在300-700bp間。將目的片段分別克隆入pIDM-T質(zhì)粒后轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1感受態(tài)細(xì)胞。經(jīng)PCR和雙酶切方法鑒定陽性克隆，抽提陽性質(zhì)粒并電轉(zhuǎn)化雞白痢沙門氏菌CVCC527菌株，經(jīng)鑒定成

3、功獲得110個含目的基因片段的雞白痢沙門氏菌本菌株克隆。將陽性克隆分別于30℃增菌后稀釋涂板，計數(shù)同樣菌液量在37℃條件下長出的重組子數(shù)和30℃條件下長出的菌落總數(shù)，并計算IPC值。根據(jù)IPC值的大小對目的基因的必需性作初步鑒定。本實(shí)驗(yàn)初步鑒定的結(jié)果為:45個為雞白痢沙門氏菌的必需基因，41個為疑似必需基因，24個為非必需基因。
　　 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用IDM方法初步鑒定出了部分雞白痢沙門氏菌必需基因，為雞白痢沙門氏菌的分子生物學(xué)研究奠