紅花中亞精胺類化合物及其生物活性研究.pdf

1、紅花是菊科紅花屬植物紅花(Carthamus tinctorius L.)的干燥管狀花，具有活血通經(jīng)、散瘀止痛、降血壓和降血脂等功效，在我國已有2500年的藥用歷史。目前，從紅花中已分離得到250多個化學成分，包括黃酮類、生物堿類、聚炔類、烷基二醇類、有機酸類、甾體類、亞精胺類等。亞精胺類化合物即具有H2N(CH2)3NH(CH2)4NH2結構單元的多胺類化合物，顯示出了廣泛的生物活性，但對此類化合物的生物活性的研究多見于某一個單體化合

2、物，未見系統(tǒng)研究不同構型的亞精胺類化合物的生物活性差異，趙剛等人曾報道亞精胺類化合物 N1, N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine對5-羥色胺（5-HT）再攝取有良好的抑制作用，因此，本文旨在分離紅花中4個不同構型的香豆酰基取代的亞精胺類化合物，研究4個亞精胺類化合物對5-HT再攝取的抑制作用，初步探討不同構型的亞精胺類化合物對5-HT再攝取的抑制作用的差異。此外，對亞精胺類化合物的分離以及生

3、物活性的研究已見多篇文獻報道，但對亞精胺類化合物的含量測定研究卻未見文獻報道，因此本文首次建立了可同時測定4個亞精胺類化合物含量的高效液相色譜分析方法，為以后亞精胺類化合物的含量測定研究提供了基礎。
　　主要研究工作如下：
　　1.亞精胺類化合物分離純化：首先采用中低壓柱色譜對紅花乙酸乙酯提取物進行極性分段；利用HPLC-Q- Exactive-MS技術快速尋找亞精胺類化合物所在部位；然后，采用Sephadex-LH20柱分

4、離、制備型高效液相色譜等方法分離目標化合物；最后，通過 ESI-MS數(shù)據(jù)、HPLC-Q- Exactive-MS結果、以及1H-NMR數(shù)據(jù)與文獻對照等方法，鑒定化合物的結構。最終分離得到4種亞精胺類化合物和一種芳香類化合物以及一種黃酮苷類化合物，分別為 N1,N5,N10-(Z)-tri-p-coumaroylspermidine(1), N1,N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(2), N

5、1(E)-N5-(Z)-N10-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(3), N1,N5,N10-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine(4)，紫丁香苷(5)以及山奈酚3-O-蕓香糖苷(6)。
　　2.亞精胺類化合物光致異構現(xiàn)象：文獻報道反式結構的亞精胺類化合物存在光致異構現(xiàn)象，因此，本文采用 HPLC法，觀察了各亞精胺類化合物在日光或者254 nm紫外光照射下的光致異構現(xiàn)象。結果發(fā)現(xiàn)發(fā)

6、現(xiàn)各亞精胺類化合物單體在光照條件下可轉化為其余三種異構體，并最終以一定比例的混合物的形式存在。光照條件相同時，不同構型的化合物最終可達到同一個平衡狀態(tài)，光照條件不同時，光致異構化后達到的平衡狀態(tài)亦不同，即各亞精胺類化合物光致異構化后最終達到的平衡狀態(tài)因光照條件的不同而不同。此外，在避光條件下各亞精胺類化合物則均較穩(wěn)定，未有異構現(xiàn)象發(fā)生。
　　3.亞精胺類化合物生物活性研究：采用經(jīng)典的大鼠腦突觸體[3H]-5-HT再攝取抑制實驗方法

7、，初步研究了4個不同構型的亞精胺類化合物對大鼠腦突觸體[3H]-5-HT再攝取的抑制作用，結果顯示4個亞精胺類化合物對[3H]-5-HT再攝取皆有抑制作用，但在同一濃度水平下，不同構型的亞精胺類化合物對[3H]-5-HT再攝取的抑制效果不同，全順式結構的亞精胺類化合物1抑制作用最弱，亞精胺類化合物2和3抑制作用較好。此外，本文利用體外實驗方法，利用半自動凝血分析儀，研究了化合物對凝血酶原時間（PT）的影響，結果發(fā)現(xiàn)各化合物均無延長 PT