大鼠骨骼肌損傷后Nrf-2、HO-1蛋白的表達(dá)及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)研究Nrf-2、HO-1蛋白在大鼠骨骼肌損傷修復(fù)過(guò)程中的分布及表達(dá)變化規(guī)律，探索其在骨骼肌損傷修復(fù)過(guò)程中的作用機(jī)制及其表達(dá)變化與損傷時(shí)間的關(guān)系。
　　方法：
　　本研究使用10～12周齡的Sprague Dawley雄性大鼠腓腸肌內(nèi)注射心臟毒素（Cardiotoxin，CTX）制作骨骼肌損傷模型，分別取損傷后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0h、1h、4h、8h、12h、16h、1d、3d、5d、7d、9d、13d、17d

2、、21d)的損傷處組織，采用HE染色法觀察骨骼肌損傷修復(fù)過(guò)程中的形態(tài)學(xué)變化，用DCFH-DA探針?lè)z測(cè)活性氧（Reactive oxygen species，ROS）含量，用Western blotting及免疫熒光染色檢測(cè)Nrf-2、HO-1蛋白表達(dá)水平，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法檢測(cè)Nrf-2 mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　注射CTX損傷大鼠骨骼肌后，損傷區(qū)肌細(xì)胞

3、迅速水腫、壞死，隨后相繼出現(xiàn)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，第5天大量新生肌細(xì)胞生成，至第21天基本完成肌細(xì)胞修復(fù)；與對(duì)照組比較，骨骼肌損傷早期（1小時(shí)內(nèi)），ROS出現(xiàn)先升后降的迅速變化；Nrf-2 mRNA及蛋白僅少數(shù)幾組表達(dá)增多，而Nrf-2蛋白核轉(zhuǎn)位在損傷后第1小時(shí)即顯著升高，在損傷后第1天核內(nèi)表達(dá)最高，隨后逐漸恢復(fù)到對(duì)照組水平；HO-1蛋白表達(dá)量在骨骼肌CTX損傷后也迅速增高，在第1到3天達(dá)高峰，隨后逐漸減少，最后恢復(fù)到對(duì)

4、照水平。實(shí)驗(yàn)觀察到骨骼肌損傷后Nrf-2蛋白陽(yáng)性細(xì)胞核率及HO-1表達(dá)量具有正線性相關(guān)，二者均隨損傷時(shí)間呈時(shí)序性變化。
　　結(jié)論：
　　1.氧化應(yīng)激信號(hào)通路參與調(diào)控大鼠骨骼肌損傷后的修復(fù)過(guò)程，Nrf-2及HO-1蛋白通過(guò)抑制過(guò)度的炎癥反應(yīng)、激活肌衛(wèi)星細(xì)胞，誘導(dǎo)其增殖及分化以及新生肌管的融合，促進(jìn)損傷骨骼肌結(jié)構(gòu)及功能的恢復(fù)。
　　2.大鼠骨骼肌在注射CTX損傷后的修復(fù)過(guò)程中，Nrf-2蛋白主要通過(guò)核轉(zhuǎn)位，增加核內(nèi)Nrf-