人體頭發(fā)中興奮劑液相色譜串聯(lián)質譜檢測方法的研究.pdf

1、目的：本論文以易被運動員濫用或檢測難度較高的興奮劑為主要研究對象，利用具有高分離效能和結構確證功能的液相色譜-串聯(lián)質譜來探索、建立毛發(fā)中興奮劑(酯類、母體、代謝物)的檢測和評價方法，并使用建立的檢測方法檢測高血壓患者頭發(fā)中的β-阻斷劑（美替洛爾和比索洛爾）和運動員頭發(fā)β2-激動劑（克侖特羅），以證明檢測方法的有效性，為采用毛發(fā)檢測興奮劑建立技術儲備。
　　方法：稱取50mg頭發(fā)，加入5μl d3-睪酮作內標，100μl蛋白酶K和1

2、00μl二硫蘇糖醇在三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液中55℃水解2小時，加入正戊烷/乙醚，振蕩、離心和冷凍，倒出上層有機相。融化下層后加入磷酸緩沖液、5μl內標和三氯甲烷/異丙醇振蕩、離心和吸取上層液體后兩次有機相混合吹干，最后用甲醇、流動相A和正己烷除去油脂，復溶（90％流動相A）后10μl進樣分析。由于酯類和非酯類復溶液不同，酯類和非酯類分開處理檢測，酯類50mg頭發(fā)，加10μl內標同上水解方法，加入正戊烷，振蕩、離心和冷凍，吹干復溶液（

3、90%流動相B）復溶后20μl進樣分析。
　　結果與討論：通過優(yōu)化色譜和質譜條件，非酯類和酯類分別采用X Bridge RP18(3.5μm，100mm×2.1mm)和Agilent ZORBAX XDB-C18（3.5μm，50mm×2.1mm）色譜柱，相對應的流速為0.2ml/min和0.4ml/min，最優(yōu)進樣量分別為10μl和20μl和最佳液相組成為2.5mM甲酸銨-0.2%甲酸-甲醇/乙腈（v：v=7:3）和2.5mM甲

4、酸銨-0.2%甲酸-甲醇/乙腈（v：v=7:3）體系。前處理優(yōu)化使非酯類檢測選擇使用正戊烷/乙醚和氯仿/異丙醇兩步液液萃取，酯類選擇了正戊烷液液萃取。方法驗證中得出線性相關系數(shù)、最低檢測限和最低定量限滿足日常定量要求和頭發(fā)中檢測興奮劑靈敏度的要求，大多數(shù)藥物日間精密度<20%，日內精密度<20%，回收率在50%以上并且基質效應多在80%-120%之間，符合一般驗證要求。將建立的檢測方法進行方法驗證和評估后應用于患高血壓患者頭發(fā)中β-阻斷