ADMA在單核-巨噬細胞分化為泡沫細胞過程中對膽固醇酯及ACAT-1表達的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察ADMA對單核/巨噬細胞分化為泡沫細胞過程中細胞內(nèi)膽固醇酯含量及ACAT-1表達的影響，初步探討ADMA在單核/巨噬細胞分化為泡沫細胞過程中的作用及其機制。
　　 方法：
　　 1．培養(yǎng)人THP-1單核細胞株，給予160nmol/L 佛波酯（phorbol myristate acetate，PMA）孵育48h，然后再與80mg/L 氧化型低密度脂蛋白（oxidized-low-densit y

2、 lipoprotein，ox-LDL）孵育24h，用油紅O 染色在光鏡下觀察。
　　 2．以不同濃度ADMA （1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L）作用泡沫細胞24h，酶比色法檢測細胞內(nèi)膽固醇酯的含量；以20μmol/LADMA作用泡沫細胞不同時間（0h、6h、12h、24h、48h），酶比色法檢測細胞內(nèi)膽固醇酯的含量。
　　 3．將THP-1單核細胞、巨噬細胞及泡沫細

3、胞分別用20μmol/L ADMA 干預24h，Wes t e r n bl o t和RT-PCR分別檢測單核細胞，巨噬細胞及泡沫細胞內(nèi)酰基輔酶A 膽固醇?；D移酶-1(ACAT-1)的蛋白和mRNA表達。
　　 結果：
　　 1.單核細胞株THP-1經(jīng)PMA 誘導后，可分化為巨噬細胞，再經(jīng)ox-LDL 誘導后，可轉化為泡沫細胞。
　　 2.與對照組相比，5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μ

4、mol/L的ADMA作用于THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞24h后，細胞內(nèi)膽固醇酯含量均明顯增加（P<0.01）。
　　 3.與對照組相比，20μmol/L的ADMA作用于THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞12h、24h及48h后，細胞內(nèi)膽固醇酯含量均明顯增加（P<0.01）。
　　 4.與THP-1單核細胞相比，巨噬細胞（P<0.05）、泡沫細胞（P<0.01）中ACAT-1蛋白及mRNA表達增加；與巨噬細胞相比，泡沫細胞中

5、ACAT-1蛋白及mRNA水平增加，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 5.與各自對照組相比，經(jīng)ADMA作用后三種細胞ACAT-1蛋白及mRNA水平表達均增加（P<0.01）。
　　 結論：
　　 1.ADMA 可顯著增加泡沫細胞內(nèi)膽固醇酯的含量，并呈時間和劑量依賴性。
　　 2.單核/巨噬細胞分化為泡沫細胞過程中ACAT-1表達增加，ADMA 可進一步上調(diào)ACAT-1的蛋白及mRNA表達。