降膽固醇益生乳酸菌的篩選及其在大鼠體內(nèi)的應(yīng)用研究.pdf

1、隨著社會(huì)的進(jìn)步，生活水平的不斷提高，人們膳食營(yíng)養(yǎng)的攝入過(guò)量而引起的心腦血管疾病的發(fā)生率逐年上升，而誘發(fā)心腦血管疾病的主要因素之一是血清膽固醇水平超標(biāo)，因此降低人體中膽固醇的含量對(duì)人類的健康至關(guān)重要。本課題研究的主要內(nèi)容是對(duì)從內(nèi)蒙古傳統(tǒng)乳制品中分離出的乳酸菌進(jìn)一步篩選，綜合模擬人工胃腸液的耐受性、疏水性能力及去結(jié)合膽鹽能力等指標(biāo)獲得一株降膽固醇功能較好的益生潛力菌株，研究其生物學(xué)特性及在大鼠體內(nèi)的降膽固醇特性，為菌株的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用奠定科

2、學(xué)的理論基礎(chǔ)。
　　 利用鄰苯二甲醛方法對(duì)4株供試乳酸菌在MRS-TRIO-OX-CHOL選擇性培養(yǎng)基（含100μg/mL膽固醇）厭氧條件下進(jìn)行膽固醇去除率的測(cè)定，結(jié)果表明4株乳酸菌的膽固醇去除率在42.47％-58.32％之間，90-1菌株的膽固醇去除率最高。利用16S rDNA同源性分析的方法對(duì)4株乳酸菌進(jìn)行鑒定，菌株90-1和L39-1為屎腸球菌，菌株L46-2為糞腸球菌，菌株L46-3為植物乳桿菌。
　　 模擬人

3、體胃腸道環(huán)境，測(cè)定菌株在酸性和高濃度膽鹽條件下的存活情況。結(jié)果表明4株菌具有較強(qiáng)的耐酸和耐膽鹽能力，完全可以通過(guò)胃進(jìn)入腸道并保持很高的活菌數(shù)。在腸道環(huán)境中處理24h后活菌數(shù)都在4.7×107以上，屎腸球菌90-1表現(xiàn)出最強(qiáng)的耐受力。采用定性平板法測(cè)定菌株的膽鹽水解酶活性，均有白色的沉淀圈產(chǎn)生，說(shuō)明這4株菌在生長(zhǎng)過(guò)程中可能具有一定的膽鹽水解酶活力。同時(shí)對(duì)菌株的去結(jié)合膽鹽能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，菌株產(chǎn)膽酸量在2.43-3.35mM之間，其中屎腸球菌9

4、0-1產(chǎn)膽酸效力最高。綜合膽固醇去除率及三個(gè)篩選指標(biāo)，屎腸球菌90-1作為降膽固醇潛力菌株綜合性能較好，可以作為目標(biāo)菌株進(jìn)行下一步研究。
　　 屎腸球菌90-1的生物學(xué)特性結(jié)果顯示，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，最適起始生長(zhǎng)pH在5-7之間。測(cè)定生長(zhǎng)曲線結(jié)果可知，菌株生長(zhǎng)較為旺盛，2h進(jìn)入對(duì)數(shù)期，12h后生長(zhǎng)穩(wěn)定。對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和李斯特菌均有良好抑制作用。利用Kirby-Bauer紙片法選擇6種標(biāo)準(zhǔn)藥敏片對(duì)屎腸球菌90-1進(jìn)

5、行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明該菌株對(duì)6種抗生素均沒(méi)有抗性。通過(guò)觀察血瓊脂平板上菌落周?chē)娜苎?，判定屎腸球菌90-1沒(méi)有溶血作用。
　　 在體外研究的基礎(chǔ)上，對(duì)屎腸球菌90-1應(yīng)用于大鼠體內(nèi)，研究其在體內(nèi)的降膽固醇特性。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，設(shè)飼喂普通飼料的對(duì)照組A、飼喂高脂飼料的高脂組B和灌喂菌液組C。實(shí)驗(yàn)28d，大鼠禁食14h采血，分離血清，檢測(cè)菌液對(duì)大鼠血清血脂四項(xiàng)的影響，對(duì)肝臟總膽固醇TC、糞便總膽固醇TC、糞便總膽酸TBA以及臟