交聯(lián)脂肪酶聚集體(CLEAs)的制備及其粒徑影響因素研究.pdf

1、作為一類新型的無載體固定化酶，交聯(lián)酶聚集體以其制備方法簡單、單位體積酶活高以及穩(wěn)定性好等受到廣泛的關注。目前對交聯(lián)酶聚集體的研究主要集中在制備及其性能考察方面，但對交聯(lián)酶聚集體粒徑的調控及其對CLEAs性能的影響關注很少。然而，CLEAs的粒徑大小不僅影響傳質效率，還關系到CLEAs的穩(wěn)定性，因此，粒徑調控對CLEAs研究和應用來說至關重要。鑒此，本研究以假絲酵母脂肪酶（Candidasp.1619）為對象，探索并優(yōu)化了其交聯(lián)酶聚集體的

2、制備條件，在此基礎上通過不同調控手段得到了不同粒徑的CLEAs，并研究了不同粒徑CLEAs在性能方面的差異。主要研究結果如下:
　　 (1)利用無載體固定化酶技術，以三倍酶液體積的丙酮為沉淀劑，2.08％的戊二醛為交聯(lián)劑，在交聯(lián)時間為120min、交聯(lián)溫度20℃、離心轉速為4000r·min-1時能得到活性和穩(wěn)定性均較游離酶理想的CLEAs。
　　 (2)利用表面活性劑Tween-20和牛血清蛋白BSA對CLEAs進行改

3、性，其活性分別提高了7％和22％。酶學性能分析顯示，CLEAs最適pH值范圍為6.0～9.0，在50℃下熱處理2h能保留60％以上的活性，與游離酶相比穩(wěn)定性得到了顯著提高。對比CLEAs和游離酶的Km和Vmax分析發(fā)現(xiàn)，CLEAs對底物的親和力較游離酶要弱，但單位時間內的催化效果要優(yōu)于游離酶。
　　 (3)對影響CLEAs粒徑因素分析表明，交聯(lián)過程是決定粒徑大小的關鍵步驟。在交聯(lián)過程加入超聲方式可使CLEAs粒徑明顯減小，但顆粒