沒食子酸對人食管癌細胞生長與凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　惡性腫瘤已成為危害人類健康的嚴重疾病之一,目前腫瘤的治療方法包括傳統(tǒng)的手術、放療、化療以及近年來興起的基因治療等。但現在臨床使用的不少的治療腫瘤的化學類藥品靶向性不是很明確，這些藥物殺死了腫瘤細胞，然而一些正常的細胞也被殺死，于是抗腫瘤藥物的探究對象變成了那些高效、低毒的自然界的植物[1-4]。最近幾年，人們對癌癥的見解以及他們在臨床工作中的生活經驗總結，得出結論"癌癥的形成是慢性病”逐漸被醫(yī)療界的人們所接受。"與腫瘤

2、并存”、減輕臨床方面癥狀、提升患者的生活質量的觀念逐漸得到了國內外各位專家學者的關注，中醫(yī)藥在治療癌癥方面的優(yōu)勢越來越突出，中醫(yī)藥在治療癌癥方面所取得的成就也逐漸被國際世界認可。中醫(yī)藥在治療腫瘤方面已經取得了相當大的成就，尤其是開發(fā)植物的中草藥中提取的抗癌有效果組分。分析各種中醫(yī)藥的化學結構式以及從他們之中提取抗腫瘤有效活性成分是當前研究方向。本研究觀察了核桃青皮提取物沒食子酸對食管癌細胞增殖、遷移、侵襲能力的影響，以及對細胞周期和Cy

3、clinD1蛋白表達的影響，從而為進一步開發(fā)核桃青皮來源的GA治療食管癌的中藥提取物提供理論根據。
　　方法:
　　本實驗將食管癌細胞KYSE150培養(yǎng)起來后，利用細胞MTT比色法來檢測沒食子酸（gallic acid）對食管腫瘤細胞KYSE150的增殖抑制率、劃痕實驗檢測沒食子酸（gallic acid）對食管腫瘤細胞KYSE150的遷移能力、transwell侵襲實驗檢測核桃青皮提取物沒食子酸（gallic acid）對

4、食管腫瘤細胞KYSE150的侵襲能力，采用流式細胞儀檢測沒食子酸對食管癌細胞KYSE150細胞凋亡和細胞周期時相性分布的影響，而且利用Western Blot檢測經過沒食子酸處理過后的食管腫瘤細胞KYSE150中的CyclinD1蛋白的表達。
　　結果:
　　1.食管腫瘤細胞KYSE150的抑制細胞生長的作用：核桃青皮提取物沒食子酸濃度分別為10、20、40、80、120μg/mL時，對KYSE150的抑制率分別為4.15％

5、、19.02%、69.64%、90.51%、93.35%（F=57.48，P<0.05）。
　　2.核桃青皮提取物沒食子酸處理24 h后食管腫瘤細胞KYSE150的遷移能力明顯下降，隨著濃度的增加，遷移率逐漸降低，當GA濃度分別為0、20、40、80μg/mL時，對KYSE150的遷移率分別為77%、51%、17%、7%，食管腫瘤細胞的遷移能力與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義（F=440.49，P<0.01）。
　　3.Tra

6、nswell小室實驗檢測GA對KYSE150細胞侵襲能力的影響：結果通過計數穿過膜的細胞來判定，結果顯示經GA處理48 h后的細胞侵襲能力明顯下降，隨著濃度的增加，穿膜細胞數逐漸減少，當GA濃度分別為0、20、40、80μg/mL時， KYSE150細胞穿膜數分別為124.66±5.50、87.33±8.62、51.00±9.53、36.00+9.54，食管腫瘤細胞的侵襲能力與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義（F=74.65，P<0.01）

7、。
　　4.流式細胞儀檢測GA對KYSE150細胞周期的影響：隨著GA濃度的增加， G0/G1期的細胞比例增加， S期和G2/M期的細胞比例減少。當沒食子酸的濃度分別為10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL時，G0/G1期的細胞比例分別為33.49%、35.80%、40.48%，呈遞增趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），S期的細胞數分別為46.60%、45.60%、45.29%，呈遞減趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0

8、.05）， G2/M期亦呈遞減趨勢。
　　5.細胞凋亡的檢測：GA能誘導食管腫瘤細胞的凋亡，并且它的凋亡率隨著沒食子酸藥物濃度的遞增而增加，呈明顯劑量依懶性。
　　6.Western Blot法測定食管腫瘤細胞KYSE150 CyclinD1蛋白的表達：對加完核桃青皮提取物沒食子酸的食管腫瘤細胞KYSE150進行提蛋白，實驗以β-actin蛋白為內參，與空白對照組相比，對結果采用Quantity one圖像處理軟件進行灰度分