托氟啶納米混懸劑的研究.pdf

1、前藥(Prodrug)是一類在體外活性很小或無活性，在體內(nèi)經(jīng)酶或非酶作用，釋放出活性物質(zhì)而發(fā)揮藥理活性的化合物，可以在保持或增強(qiáng)原藥藥效的同時，克服原藥的缺點(diǎn)。前藥設(shè)計(jì)相對風(fēng)險性小、投資少、見效快，在新藥研究中越來越受到人們的重視。托氟啶(N3-O-toluyl-flulorouracil，TFu)即N3-鄰甲苯甲?；?氟尿嘧啶，是氟尿嘧啶(5-Fu)的一個前體藥物。TFu在體外僅有很小的藥理活性，在體內(nèi)經(jīng)酰胺酶的作用轉(zhuǎn)化成具有藥理活性

2、的5-Fu。TFu能克服5-Fu毒副作用較高、以及半衰期短的缺點(diǎn)，改善藥物在體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程，提高穩(wěn)定性和生物利用度，降低毒副作用，為新一代氟尿嘧啶類抗腫瘤藥物，市場前景廣闊。
　　 但是該藥水溶性較差，可能導(dǎo)致口服生物利用度低、個體間吸收差異大、給藥劑量難以控制，而且不適合靜脈注射給藥。因此，選擇合適的新劑型以提高TFu的溶解度和生物利用度是一個亟待解決的任務(wù)。
　　 隨著納米技術(shù)的發(fā)展，納米給藥系統(tǒng)在增加藥物生物

3、利用度方面的獨(dú)特優(yōu)勢是傳統(tǒng)藥劑學(xué)手段不能媲美的。其中，藥物納米混懸劑(Nanosuspensions)是以表面活性劑為助懸劑的“純藥物”納米級別膠態(tài)分散體系，為難溶性、大劑量藥物注射給藥提供了一種新的途徑。
　　 在課題組前期工作基礎(chǔ)上，本課題采用高壓均質(zhì)法制備安全、有效的TFu納米混懸劑，并對其理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行評價，以期在難溶性藥物遞送研究方向取得一定進(jìn)展，為納米藥物的研究和應(yīng)用提供試驗(yàn)基礎(chǔ)和理論指導(dǎo)。課題主要研究方法

4、和結(jié)果如下:
　　 1.托氟啶含量測定方法的建立和體外穩(wěn)定性研究
　　 采用高效液相色譜法分別測定TFu和其原藥5-Fu的含量，并進(jìn)行了一系列方法學(xué)驗(yàn)證，還考察了TFu在PBS溶液(pH=7.4)、人工胃液、人工腸液、Wistar大鼠空白血漿中的體外穩(wěn)定性。
　　 結(jié)果表明，高效液相法測定TFu和5-Fu的含量，專屬性強(qiáng)、方法簡便、準(zhǔn)確。TFu在PBS溶液(pH=7.4)和人工胃液中比較穩(wěn)定，而24h內(nèi)在人工腸液

5、中約有40％降解，24h內(nèi)在大鼠空白血漿中幾乎全部轉(zhuǎn)化為等摩爾的5-Fu。
　　 2.托氟啶納米混懸劑的制備及體外評價
　　 采用高壓均質(zhì)技術(shù)制備了托氟啶納米混懸劑(TFu-Ns)，以粒徑、穩(wěn)定性等作為質(zhì)量評價指標(biāo)，通過處方篩選和工藝優(yōu)化確定了最佳處方和工藝。通過制備其凍干制劑，進(jìn)一步提高了TFu-Ns的穩(wěn)定性。對該制劑進(jìn)行了一系列的體外評價，包括外觀形態(tài)、粒徑及其粒度分布、Zeta電位、體外釋放行為、初步穩(wěn)定性及細(xì)胞毒

6、性等。
　　 優(yōu)選注射用大豆磷脂作為穩(wěn)定劑，最佳處方為:藥物與磷脂的比例為1∶15(w/w)，藥物濃度為3.5mg/mL;最佳制備工藝為:高速剪切3～5min，高壓均質(zhì)200bar循環(huán)5次，500bar循環(huán)10次，800bar循環(huán)10次，1000bar循環(huán)10次。冷凍干燥法制備的TFu-Ns凍干粉呈白色疏松的粉末，復(fù)溶后為具有藍(lán)色乳光的膠態(tài)溶液;冷凍干燥前，TFu-Ns的平均粒徑為(43.85±1.34)nm，Zeta電位為(-

7、7.17±1.21)mV;冷凍干燥后，平均粒徑為(180.03±3.11)nm，Zeta電位為(-8.02±1.43)mV。凍干前后三批樣品重現(xiàn)性好，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求。
　　 TFu溶液(乙腈∶水=40∶60)的釋放均最符合Higuchi方程，Q=83.49t1/2-24.88(r=0.9920);而TFu-Ns的釋放最符合雙相釋藥動力學(xué)模型，100-Q=4.65e-0.76t+2.16e-0.09t(rα=0.9975，rβ

8、=0.9905)。TFu溶液和TFu-Ns均可以在4h內(nèi)釋放90％以上。
　　 初步穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，TFu-Ns需要在低溫、密封、避光條件下保存，在4℃條件下放置3個月，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性變化。細(xì)胞毒性研究結(jié)果表明，TFu-Ns在小鼠肝微粒體混合功能氧化酶(S-9)的作用下，比等摩爾量的5-Fu注射液有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性，而空白的納米混懸劑沒有明顯細(xì)胞毒性，說明了該制劑的安全有效。
　　 3.托氟啶納米混懸劑的藥效學(xué)、藥

9、代動力學(xué)和組織分布研究
　　 以5-Fu注射液為對照，考察了荷瘤小鼠腹腔注射給藥TFu-Ns的藥效學(xué)性質(zhì)。在大鼠體內(nèi)考察了靜脈注射給藥TFu-Ns的體內(nèi)藥代動力學(xué)性質(zhì)，并同時檢測血漿中TFu和5-Fu的含量。在荷瘤小鼠體內(nèi)考察了靜脈注射給藥TFu-Ns后TFu和5-Fu在小鼠心、肝、脾、肺、腎、瘤、腦及血漿等組織器官中的分布試驗(yàn)，并與小鼠尾靜脈注射5-Fu注射液組做對比，為TFu-Ns作為藥物新制劑的研究提供一定的理論依據(jù)。

10、r>　　 藥效學(xué)研究結(jié)果表明，TFu-Ns與5-Fu注射液的瘤重抑制率分別為78.57％和75.00％，瘤體積抑制率分別為66.67％和60.00％，TFu-Ns與5-Fu注射液取得了一致的抗腫瘤效果;小鼠體重變化說明，空白納米混懸劑無明顯毒副作用，TFu-Ns的體重稍大于5-Fu注射液組，這可能與TFu作為5-Fu儲庫降低了5-Fu的毒副作用有關(guān)。
　　 大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)結(jié)果表明，TFu-Ns經(jīng)尾靜脈注射給藥后能夠轉(zhuǎn)化釋放

11、5-Fu，且5-Fu的AUC約為等摩爾量5-Fu靜注后AUC的1.4倍，TFu在體內(nèi)能起到5-Fu儲庫的作用，提高了藥物生物利用度。
　　 小鼠體內(nèi)組織分布研究結(jié)果表明，TFu-Ns能在體內(nèi)釋放出5-Fu，且5-Fu可以分布到各個器官。5-Fu注射液組中5-Fu在心、脾和腎組織分布較多，且分布到各器官迅速到達(dá)最大血藥濃度，很快消除;而TFu-Ns在體內(nèi)釋放5-Fu較平緩，在45min仍有較高的藥物濃度，可以在一定程度上延長藥物作