L-組氨酸高產(chǎn)菌株的選育.pdf

1、為了提高L-組氨酸的產(chǎn)量，解決我國(guó)L-組氨酸工業(yè)化生產(chǎn)問(wèn)題，本論文從菌種篩選開(kāi)始，對(duì)篩選到的產(chǎn)生菌進(jìn)行誘變選育，然后對(duì)高產(chǎn)菌株進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化，旨在獲得性能穩(wěn)定的L-組氨酸高產(chǎn)菌株，具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1.首先對(duì)L-組氨酸的測(cè)定方法進(jìn)行了研究，比較了幾種常用測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn)：紙層析操作簡(jiǎn)單，但只能定性測(cè)定L-組氨酸，無(wú)法準(zhǔn)確定量；Pauly比色法快速，準(zhǔn)確性較好，對(duì)儀器的要求也不高，但干擾因素較多；高效液相色譜法的

2、準(zhǔn)確度和靈敏度都很高，但操作比較繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，成本較高。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際要求，最終確定實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用多種方法相結(jié)合來(lái)測(cè)定L-組氨酸。
　　 2.在確定了測(cè)定方法之后，實(shí)驗(yàn)從大量搜集到的菌種中篩選L-組氨酸產(chǎn)生菌，對(duì)于最初的篩菌工作，采用紙層析法進(jìn)行定性分析，對(duì)初步確定的L-組氨酸產(chǎn)生菌進(jìn)行復(fù)篩，采用Pauly比色法測(cè)定，然后對(duì)獲得的少量產(chǎn)生菌，采用高效液相色譜法準(zhǔn)確測(cè)定，最終分離得到了一株產(chǎn)量較高的菌株，為谷氨酸棒桿菌CG4-2

3、，產(chǎn)量為173mg/L，作為下一步育種的出發(fā)菌株。
　　 3.對(duì)出發(fā)菌株CG4-2進(jìn)行紫外線(xiàn)，氯化鋰和硫酸二乙酯等誘變處理，獲得6-巰基嘌呤抗性、并進(jìn)一步獲得莽草酸滲漏性營(yíng)養(yǎng)缺陷型、L-組氨酸酶缺陷型突變株 CG4-2-11-57-40(6-MPR，transketolase-，histidase-)，產(chǎn)L-組氨酸的量達(dá)到2.18 g/L。通過(guò)6次傳代培養(yǎng)并進(jìn)行搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：6次傳代培養(yǎng)后L-組氨酸的產(chǎn)量變化不大，

4、證明菌株CG4-2-11-57-40具有良好的遺傳穩(wěn)定性。
　　 4.對(duì)獲得的高產(chǎn)菌株進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化，對(duì)各因素分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得到最佳培養(yǎng)基為(g/L)：葡萄糖80，硫酸銨35，玉米漿5，KH2PO4 1.5，MgSO4·7H2O 1，碳酸鈣15；最佳培養(yǎng)條件為：最佳發(fā)酵溫度30 ℃，培養(yǎng)基初始pH7.2，裝液量20 mL/250 mL三角瓶，接種量為7.0％，巡回?fù)u床轉(zhuǎn)速180 r/min，最佳種齡10 h，