若干植物活性成分與蛋白質(zhì)的相互作用研究.pdf

1、本論文主要運用熒光光譜、紫外.可見光譜、紅外光譜(FT-IR)、圓二色譜(CD)及原子力顯微鏡、分子模擬等技術,對蛋白質(zhì)與植物活性因子的相互作用進行了研究,并通過蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光的猝滅、二級結構變化和外源物質(zhì)對蛋白質(zhì)-藥物分子結合過程產(chǎn)生的影響等方面的研究,從分子水平上闡述蛋白質(zhì)與植物活性因子的作用機制,對了解藥物在體內(nèi)的運輸、代謝、分配過程以及新藥的設計與開發(fā)都具有重要的意義。
　　 論文共分為五個部分,主要結論概述如下:

2、>　　 1.簡要介紹了牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HAS)和胰蛋白酶的結構、功能和性質(zhì);綜述了藥物小分子與蛋白質(zhì)相互作用的研究現(xiàn)狀和研究方法,并著重介紹了熒光光譜法、紅外光譜法以及圓二色譜法在本研究領域的應用情況。
　　 2.在生理酸度條件下(pH7.4),采用熒光光譜法、紫外-可見光譜法、傅里葉變換紅外光譜法以及圓二色譜法研究了杜鵑素與BSA的相互作用。研究表明,杜鵑素與BSA相互作用形成了新的復合物,即杜鵑素以靜

3、態(tài)猝滅方式猝滅BSA的內(nèi)源熒光;熱力學參數(shù)焓變(△H)和熵變(6S)值分別為-29.92 kJ·mol-1和5.061 J·mol-1·K-1,表明二者之間的作用力主要是氫鍵和疏水作用力。競爭實驗表明,杜鵑素在BSA上的結合位點位于Site I。FT-IR和CD光譜結果證實杜鵑素能夠誘導BSA二級結構發(fā)生變化。同時,研究了維生素C(VC)、維生素B2(VB2)和葡萄糖對杜鵑素-BSA結合的擾動。
　　 3.采用熒光、共振瑞利散射

4、、圓二色等光譜方法和原子力顯微鏡(AFM)以及分子對接技術,研究了金絲桃苷與人血清白蛋白(HAS)的相互作用。研究發(fā)現(xiàn),金絲桃苷能顯著猝滅HAS的熒光,且金絲桃苷與HAS結合主要靠疏水作用力和氫鍵驅(qū)動。CD譜顯示,金絲桃苷誘導HAS的二級結構產(chǎn)生稍許的變化。AFM圖像和共振散射光譜表明,與金絲桃苷結合后HAS的分子直徑變大,產(chǎn)生相互聚集。利用分子對接技術預測金絲桃苷與HAS的作用區(qū)域位于HAS亞結構域IIA,預測結果與位點競爭實驗結果吻

5、合。
　　 4.采用熒光光譜法、紫外光譜法、紅外光譜法、圓二色譜法和原子力顯微鏡研究了香葉木素與人血清白蛋白的結合作用。研究表明,靜態(tài)猝滅是香葉木素導致HAS熒光猝滅的主要原因;由求得的熱力學參數(shù),確定了二者之間的作用力是疏水作用。競爭實驗和不同構型的HAS與香葉木素作用實驗表明,香葉木素在HAS上的結合位點位于Domain IIA的疏水腔中,即Site I。FT-IR和CD光譜分析表明,香葉木素能夠使HAS的構象發(fā)生變化。AF

6、M和共振銳利散射光譜顯示金絲桃苷能與HAS結合并導致:HAS分子聚集。
　　 5.應用熒光光譜和圓二色譜技術,在生理酸度條件下(pH7.4),研究了芒果苷與胰蛋白酶的相互作用。實驗揭示了芒果苷能與胰蛋白酶結合形成基態(tài)復合物從而猝滅胰蛋白酶的熒光。由van’t Hoff方程求得的熱力學參數(shù),表明芒果苷和胰蛋白酶之間的作用力類型是疏水作用。根據(jù)F(o)rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論計算出芒果苷在胰蛋白酶中的結合位置與胰蛋白酶中色氨酸殘