半乳糖功能化磁性四氧化三鐵納米顆粒的合成及其在蓖麻毒素分析中的應(yīng)用.pdf

1、蓖麻毒素是一種核糖體失活蛋白，由A、B兩條鏈通過(guò)二硫鍵連接而成，其中B鏈具有半乳糖結(jié)合位點(diǎn)，可以介導(dǎo)毒素蛋白進(jìn)入細(xì)胞；而A鏈?zhǔn)腔钚枣湥哂刑擒彰富钚?，通過(guò)水解核糖體RNA上的N-糖苷鍵使得腺嘌呤脫落導(dǎo)致核糖體失活，導(dǎo)致蛋白合成障礙，引起細(xì)胞死亡。由于蓖麻毒素具有極強(qiáng)的毒性、提取方法簡(jiǎn)便，極易被恐怖分子利用，因此已被列入《禁止化學(xué)武器公約》的第一類(lèi)控制清單之中。為應(yīng)對(duì)蓖麻毒素的潛在威脅，建立快速的分析檢測(cè)方法具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義和軍用價(jià)

2、值。
　　 目前，對(duì)蓖麻毒素的分析檢測(cè)方法主要集中在兩個(gè)方向，一個(gè)是基于抗體的免疫學(xué)方法，另外一個(gè)就基于生物質(zhì)譜的儀器分析方法。本課題從合成磁性Fe3O4納米顆粒入手，建立了基于半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒富集的免疫學(xué)分析檢測(cè)方法，同時(shí)還建立了基于半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒富集蓖麻毒素液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS/MS)的儀器分析方法?；谏鲜鰞?nèi)容，本論文分為三章：
　　 第一章簡(jiǎn)要介紹了蓖麻毒

3、素的生化特性以及目前分析檢測(cè)研究進(jìn)展，并對(duì)磁性Fe3O4的合成、穩(wěn)定性、功能化修飾以及在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用做了簡(jiǎn)單的概述。并在此基礎(chǔ)提出了本論文的立題依據(jù)、研究意義和研究思路。
　　 第二章建立了基于半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒檢測(cè)緩沖液和血清樣品中蓖麻毒素的分析方法。首先采用化學(xué)共沉淀法合成磁性Fe3O4納米顆粒，通過(guò)包被硅烷化試劑得到氨基化的磁性納米顆粒，再將化學(xué)修飾的半乳糖共價(jià)連接到磁性納米顆粒的表面，并對(duì)合成的磁性納

4、米顆粒進(jìn)行了表征。測(cè)定結(jié)果表明所得到的磁性納米顆粒的半乳糖載量約為30μg/mg，蓖麻毒素的結(jié)合量約為29μg/mg。將獲得的磁性Fe3O4納米顆粒用于蓖麻毒素的檢測(cè)分析，結(jié)果顯示生理緩沖液樣品中的毒素在2-64 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，檢測(cè)限為2 ng/mL，而血清樣品中添加的毒素在4-64 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，檢測(cè)限為4 ng/mL。該方法檢測(cè)時(shí)間短(3小時(shí))，血清樣品干擾小，可用于快速分析檢測(cè)樣品中所含的蓖麻毒素。

5、　　 第三章建立了基于LC-MS/MS檢測(cè)蓖麻毒素的方法。首先基于前期工作選取了蓖麻毒素胰酶酶解所產(chǎn)生的特異性肽段，并對(duì)其進(jìn)行了篩選，選擇出用于定性、定量的肽段，對(duì)選取的肽段進(jìn)行了質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化；再在半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒的富集濃縮的基礎(chǔ)上將所建立的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)用于蓖麻毒素的定量分析，該方法在毒素濃度為5 ng/mL-1μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，最低檢測(cè)限可達(dá)到2 ng/mL，這與普通酶鏈免疫分析的靈敏度相當(dāng)