經(jīng)水?dāng)z入三氯乙烯對(duì)小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞影響的研究.pdf

1、研究背景：有機(jī)溶劑三氯乙烯(TCE)在工業(yè)上被廣泛用作清洗劑和去脂劑。隨著電子產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展,TCE的使用量逐年上升,已成為重要的職業(yè)毒物和廣泛存在的環(huán)境污染物。除了引起明顯的靶器官毒性外,研究表明TCE暴露與包括自身免疫在內(nèi)的免疫相關(guān)效應(yīng)明顯相關(guān),而受損的免疫系統(tǒng)有助于組織損傷的發(fā)生和發(fā)展。但TCE暴露引起的免疫性損傷機(jī)制目前尚未完全闡明。
　　研究目的：通過對(duì)飲水?dāng)z入TCE后小鼠脾臟Treg細(xì)胞的數(shù)量、特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3

2、 mRNA和分泌的細(xì)胞因子IL-10檢測(cè),探討TCE暴露對(duì)小鼠Treg細(xì)胞的影響;結(jié)合小鼠肝損傷和肝臟促炎細(xì)胞因子的檢測(cè),分析經(jīng)水?dāng)z入TCE對(duì)小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響與TCE暴露所致肝損傷的關(guān)系。
　　研究方法：選用6周齡雌性BALB/c小鼠飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房,染毒前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組以及2.5 mg/ml TCE組和5 mg/ml TCE組,TCE經(jīng)飲水染毒,分別在2、4、8、12周處死動(dòng)物,

3、采集外周血并無菌取肝臟和脾臟。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量,熒光定量RT-PCR檢測(cè)Treg細(xì)胞特異轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA表達(dá)水平,ELISA檢測(cè)血清中Treg細(xì)胞分泌的IL-10含量;用生化分析法測(cè)定肝功能指標(biāo)ALT和AST,取肝臟組織制成切片進(jìn)行組織病理學(xué)觀察,ELISA法檢測(cè)肝臟組織勻漿液中促炎細(xì)胞因子IL-1、IL-6和TNF-α含量;用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：1、一般

4、情況在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠狀態(tài)良好,未出現(xiàn)個(gè)體因染毒而死亡;各組小鼠飲水量無明顯差異(F=0.89),平均飲水量為0.13 ml/(g·d),2.5 mg/ml和5.0 mg/ml TCE組小鼠平均暴露量分別為450 mg/(kg·d)和730 mg/(kg·d)。各時(shí)間點(diǎn)各組小鼠體重增長、肝臟和脾臟臟器系數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、飲水?dāng)z入TCE對(duì)小鼠Treg細(xì)胞的影響
　　2.1對(duì)脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量的影響在2、4、

5、8、12周,溶劑對(duì)照組Treg細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在2、4周,TCE暴露組Treg細(xì)胞數(shù)量均低于空白對(duì)照組及溶劑對(duì)照組(P<0.05),且高劑量組比低劑量組下降趨勢(shì)明顯;在8、12周,TCE暴露組Treg細(xì)胞數(shù)量的下降有所恢復(fù),只有8周時(shí)5.0 mg/ml TCE組顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05),其余組與對(duì)照組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.2對(duì)脾臟Foxp3 mRNA表達(dá)的影響在2、4、8、12周,溶劑

6、對(duì)照組Foxp3 mRNA表達(dá)與空白對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;TCE暴露組Foxp3 mRNA表達(dá)低于空白對(duì)照組及溶劑對(duì)照組(P<0.05),且高劑量組比低劑量組下降趨勢(shì)明顯;TCE組Foxp3 mRNA表達(dá)下調(diào)在4周時(shí)達(dá)最低,在8、12周有所回升,在12周時(shí)4組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.3對(duì)血清中Treg細(xì)胞分泌的IL-10水平的影響在2、4、8、12周,溶劑對(duì)照組血清IL-10水平與空白對(duì)照組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在

7、2、4周,TCE暴露組血清中IL-10水平均顯著低于空白對(duì)照組及溶劑對(duì)照組(P<0.05);在8、12周, TCE組IL-10水平與空白對(duì)照組及溶劑對(duì)照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.4飲水?dāng)z人TCE小鼠脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量與Foxp3 mRNA表達(dá)水平和血清中IL-10含量相關(guān)性相關(guān)分析顯示小鼠脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量與Foxp3 mRNA表達(dá)水平和血清中IL-10含量均存在顯著正相關(guān)(r=0.630,0.593,P<0.01)

8、。
　　3飲水?dāng)z入TCE對(duì)小鼠肝臟的損傷
　　3.1對(duì)肝功能的影響在2、4、8、12周,溶劑對(duì)照組小鼠ALT和AST水平與空白對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在2、4周,TCE暴露組小鼠ALT和AST與空白和溶劑對(duì)照組比較明顯升高(P<0.05),在4周時(shí)達(dá)到最高,8和12周時(shí)有所下降,但均高于空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組。
　　3.2對(duì)肝臟組織病理學(xué)的影響空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞排列整齊,胞質(zhì)均勻,胞核大而圓,核仁明

9、顯,核膜清晰;TCE染毒組小鼠肝組織有明顯的炎細(xì)胞浸潤,在4周時(shí)最明顯,8和12周時(shí)炎細(xì)胞浸潤有所減少。
　　3.3對(duì)肝組織中促炎細(xì)胞因子的影響
　　3.3.1對(duì)肝臟IL-1含量的影響在2、4、8、12周,溶劑對(duì)照組小鼠肝臟IL-1水平與空白對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在2、4周,5mg/ml TCE暴露組小鼠肝臟IL-1較空白對(duì)照組明顯升高,4周時(shí)達(dá)到最高(P<0.05),8和12周時(shí)有所下降,但均高于空白對(duì)照和溶劑對(duì)照

10、組。
　　3.3.2對(duì)肝臟IL-6含量的影響在2、4、8和12周,溶劑對(duì)照組小鼠肝臟IL-6水平與空白對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與空白對(duì)照和溶劑對(duì)照組比較,5mg/ml TCE組在4和8周時(shí)明顯升高,4周時(shí)最高(P<0.05);2.5mg/ml TCE組在8周時(shí)明顯升高(P<0.05)。
　　3.3.3對(duì)肝臟TNF-α含量的影響在2、4、8和12周,溶劑對(duì)照組與空白對(duì)照組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在2、4、8周,TCE暴露

11、組小鼠肝臟TNF-α含量均顯著高于空白對(duì)照組及溶劑對(duì)照組,4周時(shí)達(dá)到最高(P<0.05)。
　　3.3.4肝功能與肝臟IL-1、IL-6和TNF-α含量的相關(guān)性相關(guān)性分析顯示肝功能ALT和AST,與肝臟中IL-1、IL-6和TNF-α含量之間存在顯著正相關(guān)(r=0.526,0.510,0.614,0.518,0.525,0.630,P<0.01)。
　　4肝功能、肝臟IL-1、IL-6和TNF-α含量與Treg細(xì)胞數(shù)量的相關(guān)

12、性相關(guān)性分析顯示肝功能ALT和AST,肝臟IL-1、IL-6、TNF-α含量與Treg細(xì)胞數(shù)量之間存在顯著負(fù)相關(guān)(r=0.723,0.632,0.525,0.419,0.567,P<0.01)。
　　結(jié)論：1經(jīng)水?dāng)z入TCE對(duì)小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞有顯著影響,導(dǎo)致Treg細(xì)胞數(shù)量、特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA表達(dá)和分泌的細(xì)胞因子IL-10表達(dá)水平顯著降低。
　　2經(jīng)水?dāng)z入TCE可導(dǎo)致小鼠肝臟損傷,ALT、AST以及肝臟組織中促