I期非小細胞肺癌miRNA-34b-c編碼DNA甲基化的研究.pdf

1、目的:肺癌是世界上發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤?；颊咚劳龅闹饕蚴悄[瘤的復發(fā)與轉移,即使Ⅰ期非小細胞肺癌,也有大約30％到40％的患者死于術后的腫瘤復發(fā)與轉移。因此,對肺癌的診斷和預后評判的分子標志物及分子分期越來越受到研究者的重視。miRNA表達譜可以作為肺癌的診斷和預后分子標志物。最近的研究顯示,miRNA-34家族表達受p53轉錄活性和DNA甲基化狀態(tài)的直接調控。本研究的目的是miRNA-34家族的DNA甲基化與Ⅰ期非小細胞肺癌

2、術后復發(fā)的相關性。
　　 方法:1999至2005年,中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院胸外科共收治非小細胞肺癌患者4702例,其中833例患者術后病理論斷為Ⅰ期非小細胞肺癌,占全部病例的17.72％。入組本研究的所有Ⅰ期非小細胞肺癌患者術前及術后復發(fā)前均未進行輔助放化療及生物治療,圍手術期死亡患者及術后非腫瘤原因死亡患者均未納入本研究。共有161例符合本研究的入組條件。且可以從病理科獲得石蠟包埋腫瘤組織,所有患者均隨訪滿5年,術后復發(fā)病例

3、均有明確影像學或病理學證據(jù),死亡病例均是死于腫瘤及腫瘤引起的并發(fā)癥。
　　 161例Ⅰ期非小細胞肺癌的石蠟包埋腫瘤組織樣本被納入此研究,通過巢式甲基化特異PCR的方法,我們檢測了其miR-34a與miR-34b/c的DNA甲基化狀態(tài)。另外,通過相對定量RT-PCR的方法,我們檢測了這批樣本的成熟miR-34b與miR-34c的表達水平。
　　 所有的統(tǒng)計分析都使用SPSS13.0軟件進行。臨床因素(性別,年齡,分期,病理

4、類型,手術方法,吸煙史及腫瘤家族史)與腫瘤復發(fā)的相關性采用Chi-square t檢驗,同樣的方法用于分析miR-34a及miR-34b/c甲基化狀態(tài)與腫瘤復發(fā)的相關性。多因素logistic回歸模型用于檢驗miR-34b/c甲基化狀態(tài)與臨床因素的關系。通過log-rank檢驗的Kaplan-Meier方法比較總生存時間與無病生存時間。Cox回歸模型,用于檢驗總生存時間和無病生存時間與臨床因素及miR-34b/c甲基化狀態(tài)的相關性。甲基

5、化組及非甲基化組的miR-34b/c的表達水平,通過非配對Wilcoxon(Mann-Whitney)檢驗。P<0.05認為具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:全部161例樣本DNA經重亞硫酸鹽修飾后,通過巢式MSP進行擴增。其中98.1％(158/161)可以擴增出miR-34a,96.9％(156/161)可以擴增出miR-34b/c。對于miR-34a,其啟動子區(qū)DNA甲基化率在復發(fā)組為39.2％(20/51),而在非復發(fā)組為3

6、5.5％(38/107)；對miR-34b/c,其啟動子區(qū)DNA甲基化率在復發(fā)組為54.9％(28/51),而在非復發(fā)組為36.2％(38/105),miR-34b/c啟動子區(qū)高甲基化與Ⅰ期非小細胞肺癌術后復發(fā)有明顯相關性(p=0.026),而miR-34a與患者術后復發(fā)未發(fā)現(xiàn)明顯相關性。
　　 通過分析可以擴增出miR-34b/c的156例Ⅰ期非小細胞肺癌患者的術后總生存時間,及無病生存時間,發(fā)現(xiàn)非甲基化組預后明顯好于甲基化組

7、患者,總生存時間(p=0.010),無復發(fā)生存時間(p=0.017)。非甲基化組與甲基化組的術后中位總生存時間分別為56個月與51個月；非甲基化組與甲基化組的術后中位無復發(fā)生存時間分別為52個月與48個月。多因素回歸分析顯示,miR-34b/c甲基化狀態(tài)是獨立于分期,分化,病理類型,吸煙史等臨床因素的總生存及無復發(fā)生存獨立預后因素。
　　 采用相對定量RT-PCR的方法,檢測了可以擴增出miR-34b/c的156例Ⅰ期非小細胞肺

8、癌組織樣本的成熟miR-34b與miR-34c的表達水平。成熟miR-34b在甲基化組的中位相對表達水平為1.59,在非甲基化組的中位相對表達水平為1.85；成熟miR-34c在甲基化組的中位相對表達水平為1.64,在非甲基化組的中位相對表達水平為1.78。顯示miR-34b/c啟動子區(qū)甲基化對其成熟序列表達無影響。
　　 通過定量RT-PCR方法檢測了成熟miR-34b與miR-34c相對表達水平后,我們分析了其水平與Ⅰ期非小

9、細胞肺癌術后生存的關系。在全部156例樣本中成熟miR-34b的中位相對表達水平為1.72,據(jù)此將156例樣本分為兩組:相對表達大于1.72為miR-34b高表達組,相對表達低于1.72為miR-34b低表達組；同樣地,在全部156例樣本中成熟miR-34c的中位相對表達水平為1.76,據(jù)此將156例樣本分為兩組:相對表達大于1.76為miR-34c高表達組,相對表達低于1.76為miR-34c低表達組。通過log-rank檢驗的Kap

10、lan-Meier方法比較總生存時間與無復發(fā)生存時間,我們發(fā)現(xiàn)成熟miR-34b與miR-34c相對表達水平與Ⅰ期非小細胞肺癌術后總生存時間及無復發(fā)生存時間無顯著相關性。
　　 結論:miR-34b/c甲基化狀態(tài)與Ⅰ期非小細胞肺癌術后生存相關。miR-34b/c的DNA甲基化是Ⅰ期非小細胞肺癌的獨立預后因素,miR-34b/c的DNA甲基化可以作為判斷Ⅰ期非小細胞肺癌預后的潛在分子標志物。
　　 miR-34a的DNA甲