云芝糖肽(PSP)誘導(dǎo)Molt-4細胞細胞周期阻滯及其調(diào)控機制研究.pdf

1、云芝糖肽(Polysaccharopeptide of Trametes versicolor,PSP)是從云芝Coy-1菌株深層培養(yǎng)菌絲體內(nèi)提取的結(jié)合蛋白多糖。作為國家Ⅱ類新藥,云芝糖肽被用于癌癥病人減輕化療放療產(chǎn)生的毒副作用。體外研究證明云芝糖肽可以抑制人白血病細胞Mol-4增殖,并且誘導(dǎo)凋亡,但PSP對白血病細胞周期的阻滯時相尚存在爭議。本課題就云芝糖肽(PSP)阻滯人白血病Molt-4細胞周期的時相及其調(diào)控機制進行研究。

2、　　 用BrdU短暫標記Molt-4細胞進行細胞時相示蹤,再用PI染色DNA后流式細胞分析術(shù)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)5和25μg／ml PSP處理3,6和9 h可使被BrdU標記的S期細胞隨著PSP濃度的增加和時間的延長而積累,其中在25μg／mlPSP處理6 h后早S期和中S期細胞由對照組的17.45％增加至25.13％。高濃度的PSP(0.1mg／ml)在12和24h時也顯示出時效依賴的S期阻滯作用,24h時PSP處理組S細胞比例由對照組的

3、56.02％增加為67.26％。更高的濃度(0.5和1mg／ml)和更長的處理時間(48h)下凋亡細胞比例隨PSP作用濃度提高而顯著增加,1mg／ml處理組凋亡細胞比例達到47.03％,與0.5mg／ml處理組相比增加了6.58％,但同時S期細胞減少了10.48％,提示PSP對Molt-4的抑制作用是通過使周期時相阻滯在S期進而發(fā)生凋亡而實現(xiàn)的。
　　 Western Blot法測定PSP25μg／ml處理6h,12h和24h后

4、Molt-4細胞S期控制相關(guān)信號分子CDK2的表達量,發(fā)現(xiàn)PSP短時間處理即可顯著上調(diào)CDK2的表達量,6h時CDK2表達量與對照組相比的增幅為170％。流式細胞術(shù)CyclinE／DNA和CDK2／DNA雙參數(shù)法進一步分析了25μg／mlPSP處理24h后的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)PSP不僅可以上調(diào)CyclinE和CDK2的表達水平,使其平均熒光強度分別比對照組增加了16.80％和9.39％,更可提升CyclinE和CKD2高表達的細胞百分比,使其高