幽門(mén)螺旋桿菌在阿爾茨海默病發(fā)病中的作用和機(jī)制.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s Disease, AD）是一種最常見(jiàn)的老年癡呆癥，目前全世界患病人數(shù)已超過(guò)3500萬(wàn)。AD的特征性病理改變是腦內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)（Neurofibrillary tangles, NFTs）的形成，老年斑（Senile plaques, SP）大量沉積和神經(jīng)元退變死亡。到目前為止，AD的病因尚未闡明。臨床上僅有5％的患者被發(fā)現(xiàn)存在相關(guān)致病基因，95％為散發(fā)性，提示AD的發(fā)生和環(huán)境因素密切相關(guān)。

2、　　幽門(mén)螺旋桿菌（Helicobacter pylori, H.pylori）為寄生在胃黏膜的革蘭氏陰性螺旋桿菌，全球大約有一半以上的人胃內(nèi)有 H.pylori感染，其中老年人群感染率尤高。大量臨床研究表明，H.pylori慢性感染不僅直接導(dǎo)致慢性胃炎、胃潰瘍并促進(jìn)胃癌發(fā)生，也可引起或促進(jìn)消化系統(tǒng)外疾病，如格林巴利綜合癥（脊神經(jīng)和周?chē)窠?jīng)的脫髓鞘疾病）、高血壓、缺血性心臟病、腦缺血和中風(fēng)，而這些疾患均為AD發(fā)生的危險(xiǎn)因子。最近的一些臨床

3、流行病學(xué)調(diào)查研究為H.pylori感染與AD相關(guān)提供了更為直接的臨床證據(jù)。但是H.pylori感染到底通過(guò)何種途徑促進(jìn)AD的發(fā)生，其機(jī)制尚無(wú)報(bào)道。
　　本研究中重點(diǎn)探討了H.pylori感染對(duì)tau蛋白磷酸化、Aβ40、Aβ42生成以及大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響及其機(jī)制。主要結(jié)果如下：
　　第一部分幽門(mén)螺旋桿菌通過(guò)激活GSK-3β導(dǎo)致AD樣tau蛋白過(guò)度磷酸化
　　微管相關(guān)蛋白tau的過(guò)度磷酸化參與包括阿爾茨海默病在內(nèi)的許

4、多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。有報(bào)道認(rèn)為幽門(mén)螺旋桿菌感染是AD發(fā)病的危險(xiǎn)因素，但尚無(wú)直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　目的:闡明H.pylori感染對(duì)tau蛋白磷酸化的影響及其機(jī)制。
　　材料和方法:實(shí)驗(yàn)在整體和細(xì)胞水平進(jìn)行。整體水平采用雄性SD大鼠，腹腔注射H.pylori濾液，280μl/只/天，給濾液濃度研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基（體積比1：1）對(duì)照組、中濃度和高濃度H.pylori濾液注射組、對(duì)應(yīng)濃度大腸桿菌（

5、Escherichia coli. E.coli）濾液注射對(duì)照組，依據(jù)濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定給濾液時(shí)間點(diǎn)研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基注射14天對(duì)照組、中濃度H.pylori濾液注射7天組、14天組和21天組，注射完畢后，麻醉取腦分離海馬，用免疫印跡檢測(cè) tau蛋白AD相關(guān)位點(diǎn)磷酸化水平，用免疫組化檢測(cè)tau蛋白在神經(jīng)元內(nèi)的定位及小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況，用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)炎癥介質(zhì)IL-8和TNF-a的含量。細(xì)胞水平采用小鼠成神

6、經(jīng)瘤（N2a）細(xì)胞系，給濾液濃度研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基作為對(duì)照，低、中、高濃度 H.pylori濾液孵育24小時(shí)組，對(duì)應(yīng)濃度E.coli濾液孵育24小時(shí)組。依據(jù)濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果給濾液時(shí)間點(diǎn)研究分組如下：DMEM/Opti-MEM混合培養(yǎng)基對(duì)照組，中濃度H.pylori濾液孵育6、24和36小時(shí)組。免疫印跡檢測(cè)tau磷酸化水平，tau相關(guān)蛋白激酶/磷酸酯酶活性；給予GSK-3抑制劑氯化鋰和 SB216763預(yù)處理N

7、2a細(xì)胞30分鐘，再用H.pylori濾液孵育24小時(shí)，免疫印跡檢測(cè)tau磷酸化水平。
　　結(jié)果:H.pylori濾液大鼠腹腔注射或孵育小鼠成神經(jīng)瘤細(xì)胞均導(dǎo)致AD相關(guān)tau蛋白磷酸化位點(diǎn)如Thr205、Thr231和Ser404明顯過(guò)度磷酸化，并伴有糖原合酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK3β）的激活。給予 GSK-3抑制劑能有效逆轉(zhuǎn) H.pylori濾液導(dǎo)致的tau蛋白過(guò)度磷酸化。相同