精子相關抗原SPAG6與TAC1和TCTE3蛋白相互作用關系的探討.pdf

1、目的：探討精子相關抗原SPAG6與TAC1和TCTE3之間是否存在相互作用。
　　方法：提取健康成年雄性小鼠（18-20g)睪丸、腦、肝、腎、心、肺、脾、肌肉8種組織的總RNA，逆轉錄成cDNA，設計小鼠TacJ與Tcte3的特異性引物，PCR法觀察Tael及Tcte3在各組織中的表達；以小鼠睪丸組織cDNA為模版，PCR擴增Tael和Tcte3序列，構建Tacl/pGADT7、Tacl/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、

2、Tcte3/pEGFPN2的重組質粒，將含有pEGFP-N2載體的質粒轉染至CHO細胞和C0S-1細胞中，采用免疫熒光染色及Western Blot檢測TAC1和TCTE3在細胞中的定位和蛋白表達。將Tacl/pGADT7、Tcte3/pGADT7與SPAG6/PGBKT7進行酵母雙雜交實驗，提取酵母蛋白，Western Blot檢測TAC1與SPAG6、TCTE3與SPAG6之間是否存在相互作用。
　　結果：主要在睪丸、腦、心臟

3、中表達，在睪丸、腦、肝、腎、肺、脾、肌肉中均有表達。酶切和測序鑒定表明，Tacl/pGADT7、Tacl/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2的重組質粒構建成功。體外實驗發(fā)現(xiàn)TAC1和TCTE3分別表達于整個胞體和胞漿，當共轉染SPAG6質粒后，TAC1及 TCTE3的定位均被轉移至細胞微管中。酵母雙雜交實驗顯示TAC1/SPAG6和TCTE3/SPAG6組合在缺少三種氨基酸（Leu、Trp、His)的培