CIK細胞對A549人肺癌細胞株的抗增殖和誘導凋亡作用的研究.pdf

1、目的:研究多種細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)對A549肺癌細胞株的抗增殖和誘導凋亡作用，并探討其作用機制。
　　方法：應用MTT法檢測CIK細胞對肺癌細胞株的抗增殖作用的影響及細胞毒活性；通過倒置顯微鏡、透射電鏡、AO/EB熒光染色觀察凋亡細胞的形態(tài)學改變；應用末端脫氧核苷酸轉移酶﹙TdT﹚介導的脫氧核苷酸缺口末端標記﹙TUNEL﹚法檢測CIK細胞誘導凋亡的情況；通過免疫細胞化學染色法檢測 A549細胞中凋亡相關基因 p53、F

2、as、caspase-3,caspase-8,caspase-9、survivin蛋白,細胞增殖相關蛋白 Ki-67的陽性表達率，以探討其在誘導肺癌細胞凋亡中的作用。
　　結果：
　　(1)MTT比色法表明隨著CIK細胞與肺癌細胞效靶比增加及作用時間延長，抑制率明顯增強。同一作用時間不同效靶比之間有顯著性差異，不同作用時間同一效靶比之間也有顯著性差異；
　　(2)倒置顯微鏡觀察：CIK細胞向靶細胞方向靠近，形成典型的玫

3、瑰花環(huán)狀改變。腫瘤細胞胞漿出現(xiàn)顆粒狀物，有的CIK細胞游入肺癌細胞質或胞核內殺傷腫瘤細胞，腫瘤細胞數(shù)明顯減少，對照組肺癌細胞生長良好；
　　(3)HE染色：CIK實驗組同倒置顯微鏡下所見；
　　（4）透射電鏡觀察結果：在效靶細胞混合培養(yǎng)5小時和14小時后，多數(shù)靶細胞內可見到染色質濃縮，核仁分解，胞質內出現(xiàn)空泡，凋亡小體形成。在效靶細胞共育24小時后，絕大多數(shù)靶細胞死亡，死亡方式有細胞凋亡及溶解壞死兩種；
　　（5）AO

4、/EB熒光染色觀察：實驗組腫瘤細胞減少，凋亡細胞增多，細胞體積縮小，部分細胞核破裂；
　?。?）TUNEL法檢測結果：效靶細胞混合培養(yǎng)后，起初隨時間延長凋亡細胞逐漸增多，5－14小時凋亡率明顯上升，14－24小時凋亡率下降；
　?。?）免疫細胞化學染色的結果表明：CIK實驗組p53、Ki-67、survivin蛋白隨作用時間的延長而均下降，F(xiàn)as、caspase-3,caspase-8,caspase-9蛋白表達上調，與對照

5、組相比較均有顯著性差異。
　　結論：
　　1．CIK細胞對A549肺癌細胞具有抗增殖及誘導凋亡作用。
　　2．CIK細胞對A549肺癌細胞的抗增殖作用機制可能與下調Ki-67蛋白的表達，使癌細胞處于靜止期有關。
　　3．CIK細胞對A549肺癌細胞的誘導凋亡作用機制可能與下調p53、survivin蛋白的表達,上調Fas、caspase-3,caspase-8,caspase-9蛋白的表達有關,經由細胞凋亡的死亡