兩棲類抗菌肽Temporin-1CEa對乳腺癌細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、抗菌肽是天然免疫中的一種重要介質(zhì)，是生物體在抵御病原微生物的防御反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的一類具有抗菌抗癌等生物活性的多肽。本論文中，Temporin-1CEa是從中國林蛙皮膚分泌物中提取出來的抗菌肽，由17個氨基酸組成，分子凈電荷為+3，呈兩親性的α-螺旋結(jié)構(gòu)，具有較好的抗癌活性。
　　 本論文主要探討了抗菌肽Temporin-1CEa對人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、Bcap-37細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)和可能的作用機(jī)制。為此，我

2、們首先通過MTT方法測定了Temporin-1CEa對包括3種乳腺癌在內(nèi)的12種腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用；然后選取人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和Bcap-37細(xì)胞進(jìn)行作用機(jī)制的研究：通過乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)法和Annexin V/PI雙染法檢測了Temporin-1CEa誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞死亡的方式。在研究Temporin-1CEa對癌細(xì)胞膜的作用時，分別采用熒光探針DiBAC4(3)和

3、CalceinAm/EthD-1對腫瘤細(xì)胞的膜電位，膜損傷程度及膜通透性進(jìn)行考察；并通過熒光探針Rhodamine123、Fluo3-AM，分析Temporin-1CEa作用于乳腺癌細(xì)胞后線粒體膜電位以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的的變化情況。
　　 結(jié)果顯示：兩棲類皮膚活性肽Temporin-1CEa分別作用于12種腫瘤細(xì)胞1h、6h、24h、48h后，大部分癌細(xì)胞在1h左右開始出現(xiàn)死亡，并與劑量呈正相關(guān)性，而正常的細(xì)胞則沒有出現(xiàn)明顯的