豬帶絳蟲熱休克蛋白90α基因的克隆表達及免疫學功能的初步研究.pdf

1、目的：生物信息學分析和預(yù)測豬帶絳蟲熱休克蛋白90α(Taenia solnium Heat shock protein90 alpha）基因及其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)和特性，原核克隆表達豬帶絳蟲熱休克蛋白90α基因(Ts HSP90α),對重組Ts HSP90α其免疫學功能進行初步研究。
　　方法：利用美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)（E

2、xPASY，http://ca.expasy.org/）中有關(guān)基因和蛋白的序列和結(jié)構(gòu)信息分析的各種工具，結(jié)合其它生物信息學分析軟件包，如 Vector NTI suite,從豬帶絳蟲全長cDNA質(zhì)粒文庫中識別Ts HSP90α基因及其編碼區(qū)，分析、預(yù)測該基因編碼蛋白質(zhì)的理化特性、翻譯后的修飾位點、功能域、亞細胞定位、拓撲結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、三維空間構(gòu)象等。將豬帶絳蟲成蟲HSP90α克隆到原核表達質(zhì)粒pET-28a(+)中,在大腸埃希菌BL2

3、1/DE3中用 IPTG誘導(dǎo)表達,表達產(chǎn)物通過十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定,用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化,純化的重組蛋白用蛋白印跡(Western Blotting)進行免疫學分析。
　　結(jié)果：該基因全長1079bp,編碼區(qū)為176bp－1054bp，編碼292個氨基酸，為全長基因；BLASTX發(fā)現(xiàn)該基因是熱休克蛋白90α的同源基因； PCR、雙酶切及DNA測序結(jié)果均表明pET-28a(+

4、)-Ts HSP90α重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果表明目的基因在大腸埃希菌 BL21/DE3中獲得高效表達,經(jīng)親和層析獲得了高純度蛋白。重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識別,表明其具有免疫原性；同時，重組蛋白能被豬帶絳蟲患者，亞洲帶絳蟲患者及牛帶絳蟲患者血清識別，表明重組蛋白具有免疫反應(yīng)性。
　　結(jié)論：應(yīng)用生物信息方法從豬帶絳蟲成蟲 cDNA文庫中篩選出了HSP90α基因，并對其所編碼蛋白的結(jié)構(gòu)與功能進行預(yù)測。豬帶絳蟲成