大黃炭對激光誘導的小鼠脈絡膜新生血管模型的干預療效及其機制研究.pdf

1、目的:
　　中藥方劑在治療年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-relatedmaculardegeneration，AMD)中取得了良好的臨床療效。已經(jīng)發(fā)明的一種中藥方劑(專利號:WO2012079419)經(jīng)過臨床實驗顯示了其在治療濕性AMD方面的積極作用，此項試驗的目的在于揭示作為方劑成分之一的大黃炭(charred Radix et Rhizoma Rhei，CRRR)對于半導體倍頻激光誘導的小鼠脈絡膜新生血管(choroidalne

2、ovascularization，CNV)模型的治療效果及其可能機制。
　　方法:
　　1、用半導體倍頻激光照射C57BL/6小鼠，通過引起B(yǎng)ruch's膜的破裂誘發(fā)CNV。
　　2、將誘發(fā)了CNV的30只C57BL/6小鼠隨機分為CRRR干預組(15只)和對照組（15只）。
　　3、將CRRR干預組的小鼠給予CRRR的水溶液灌胃（濃度為0.6 g/100 ml;劑量為1 ml/0.1 kg;一天兩次灌胃，共計2

3、1天）。
　　4、將對照組的小鼠給予生理鹽水灌胃（劑量為1 ml/0.1 kg;一天兩次灌胃，共計21天）。
　　3、將CRRR干預組和對照組的各5只小鼠在半導體倍頻激光照射后第7天處死，收集視網(wǎng)膜組織采用定量聚合酶鏈反應(quantitative polymerase chain reaction，qPCR)測定白細胞介素-10(interleukin-10，IL-10)和血管內(nèi)皮生長因子(vascularepitheli

4、al growth factor，VEGF)在mRNA水平的表達。
　　4、將CRRR干預組和對照組的各5只小鼠在半導體倍頻激光照射后第7天處死，收集視網(wǎng)膜組織采用western blot測定IL-10和VEGF的蛋白表達。
　　5、在半導體倍頻激光照射后的第14天和第21天分別將CRRR干預組和對照組的小鼠進行眼底熒光血管造影（fundus fluorescein angiography，F(xiàn)FA）檢查，將造影圖片進行分級以

5、評估血管滲漏的程度。
　　6、在半導體倍頻激光照射后第22天，將CRRR干預組和對照組其余的小鼠處死，摘取眼球后制備視網(wǎng)膜鋪片，進行三維共焦顯微鏡檢查以評估CNV的體積。
　　結(jié)果:
　　1、在半導體倍頻激光照射后的14天和21天，將FFA圖片進行分級并比較，在將CRRR干預組和對照組中與臨床相關(guān)的組織損害（2b級）的比較中沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的差異。
　　2、在半導體倍頻激光照射后第7天，qPCR顯示CRRR干

6、預組相對于對照組而言，IL-10在mRNA水平的表達顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義，(P＜0.05)。
　　3、在半導體倍頻激光照射后第7天，Western blot顯示CRRR干預組相對于對照組而言，IL-10的蛋白表達顯著增加，差異具有統(tǒng)計學意義，(P＜0.05）。
　　4、在半導體倍頻激光照射后7天，qPCR顯示CRRR干預組相對于對照組而言，VEGF在mNA水平的表達沒有顯著增加，差異沒有統(tǒng)計學意義，（P＞0.05）<

7、br>　　5、在半導體倍頻激光照射后第7天，Western blot顯示CRRR干預組相對于對照組而言，VEGF的蛋白表達沒有顯著增加，差異沒有統(tǒng)計學意義，（P＞0.05）。
　　6、在半導體倍頻激光照射后22天，用共焦顯微鏡對視網(wǎng)膜鋪片的CNV進行體積測定，在CRRR干預組和對照組的比較中沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的差異，（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、CRRR干預組相對于對照組而言，IL-10在mRNA水平的表達