C5-siRNA對乳鼠心肌細胞缺氧復(fù)氧損傷的保護作用.pdf

1、目的:
　　 本課題分為兩部分,研究采用RNA技術(shù),通過沉默C5補體激活產(chǎn)物的表達而抑制H/R心肌細胞補體的激活,進而探討其對心肌細胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響。(1)研究C5-siRNA對乳鼠心肌細胞缺氧.復(fù)氧損傷的保護作用。(2)探討C5-siRNA對乳鼠H/R損傷心肌細胞C5表達量的影響。
　　 方法:
　　 (1)將培養(yǎng)的原代單層心肌細胞隨機分為4組:正常對照組(Control組)、缺氧復(fù)氧組(H/R組)、H/

2、R+C5-siRNA組、H/R+空載體病毒組。其中后三組均經(jīng)歷2小時缺氧和4小時復(fù)氧,H/R+C5-siRNA組及H/R+空體病毒組在缺氧前2小時分別給予C5-siRNA及空載體病毒。用CCK-8快速比色法檢測心肌細胞增殖情況(測OD值)。
　　 (2)將培養(yǎng)的原代單層心肌細胞隨機分為4組:正常對照組(Control組)、缺氧復(fù)氧組(H/R組)、H/R+C5-siRNA組、H/R+空載體病毒組。按方法(1)設(shè)計加入試劑后按上述條

3、件培養(yǎng)。分別用RT-PCR法及WesternBlot法從RNA基因水平及蛋白水平測定C5表達量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)H/R+C5-siRNA組測定OD值顯著高于H/R組及 H/R+空載體病毒組(P<0.05)。
　　 (2)用RT-PCR法及Western Blot法測定,H/R+C5-siRNA組C5表達量均顯著低于H/R組及H/R+空載體病毒組。
　　 結(jié)論:
　　 (1)C5-siR