骨髓間充質干細胞神經元樣細胞誘導分化過程中端粒酶的變化.pdf

1、[目的]
　　 觀察體外鼠骨髓間充質干細胞向神經元樣細胞誘導分化過程中端粒酶的變化，了解分化過程中端粒酶逆轉錄酶與端粒酶的關系，為臨床進行神經元樣細胞應用提供理論基礎。
　　 [方法]
　　 1.取SD大鼠骨髓，密度梯度離心和貼壁法分離和純化BMSCs，原代培養(yǎng)后傳代，觀察細胞形態(tài)特征，繪制生長曲線，流式細胞儀鑒定其表面抗原。
　　 2.取第3至5代培養(yǎng)的鼠骨髓間充質干細胞，應用β-巰基乙醇，二甲基亞砜/

2、丁羥茴香醚/依達拉奉(DMSO/BHA/EDR)聯(lián)合誘導法誘導其向神經元樣細胞分化，觀察誘導分化后細胞形態(tài)變化，免疫細胞化學方法檢測細胞NSE、GFAP表達，TRAP-ELISA法檢測鼠骨髓間充質干細胞誘導前后端粒酶下活性的變化，RT-PCR檢測BMSCs分化前后TERT基因mRNA表達，Western blotting檢測BMSC分化前后TERT蛋白表達。
　　 [結果]
　　 1.密度梯度離心和貼壁法分離、純化培養(yǎng)的

3、hBMSCs呈梭狀，具有均質性好，細胞增值活力強、傳代生長快的特點。流式細胞儀檢測BMSCs表面抗原，結果顯示CD29、CD44、CD105陽性，CD34、CD45陰性；
　　 2.經DMSO/BHA/EDR誘導分化后大部分細胞表現(xiàn)為富有突起的錐狀細胞，突起延伸交織成網(wǎng)，呈現(xiàn)典型神經元樣細胞，NSE陽性細胞率高表達，GFAP在實驗組中弱表達。TRAP-ELISA結果顯示誘導4h前細胞端粒酶活性性變化不明顯，當誘導6h以后細胞端粒