卡托普利對同型半胱氨酸硫內酯損傷血管內皮的保護作用及機制探討.pdf

1、第一章同型半胱氨酸硫內酯(HTL)對大鼠離體胸主動脈內皮功能的直接損傷作用及卡托普利保護作用的研究 目的：探討含巰基的血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)卡托普利對HTL所致大鼠離體胸主動脈內皮功能損傷的保護作用。 方法：大鼠離體胸主動脈環(huán)與HTL(3～30mmol/L)孵育90min，檢測乙酰膽堿(Ach)引起的內皮依賴性舒張反應和硝普鈉(SNP)引起的非內皮依賴性舒張反應。同時檢測血管組織中丙二醛(MDA)和一氧化氮(

2、NO)含量。 結果： (1)HTL(3，10，30mmol/L)濃度依賴性地抑制了ACh引起的血管內皮依賴性舒張反應(EDR)，對SNP引起的非內皮依賴性舒張反應無明顯影響； (2)HTL在抑制大鼠胸主動脈EDR的同時，增加血管組織MDA的含量、降低了NO水平； (3)卡托普利(0.003，0.01，0.03mmol/L)濃度依賴性地減輕了HTL對大鼠胸主動脈EDR的抑制作用，卡托普利(0.03mmol/

3、L)抑制了HTL所致的血管組織中MDA含量的升高，減輕HTL所致NO水平的降低；NO合酶抑制劑L-NAME和巰基抑制劑PHMB能分別取消和部分取消卡托普利對血管EDR的保護作用；而且卡托普利的這種保護效應強于等濃度下的不含巰基的ACEI類依那普利拉以及Ang Ⅱ受體拮抗劑氯沙坦； (4)含有巰基的抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)、超氧化物歧化酶(SOD)、NADPH氧化酶的抑制劑Apocynin、L-精氨酸(L-Arg)也能顯

4、著減輕HTL對血管EDR反應的損傷作用、增加NO的水平、減少血管組織中的MDA含量。 結論： (1)HTL在體外能直接損傷血管EDR反應，其損傷機制可能與啟動氧化應激反應有關。 (2)含巰基和不含巰基的ACEI二者均能顯著減輕HTL所致的血管內皮功能損傷，但前者大于后者；其保護作用的機制與提高NO水平和清除自由基有關，其中卡托普利所含的巰基可能起了重要作用。 第二章 HTL對在體大鼠血管內皮功能的損傷作用

5、及卡托普利的保護作用及機制研究 目的：探討卡托普利對HTL所致在體大鼠血管內皮功能損傷的保護作用及其機制。 方法：采用HTL灌胃8周的方法造成大鼠的高同型半胱氨酸血癥模型，同時用卡托普利(10，20，40mg/kg/day)干預。處死動物，取胸主動脈檢測內皮依賴性及非內皮依賴性舒張反應，同時檢測血中PON1、ACE以及SOD活性，Ang Ⅱ、6-keto-PGF<,1α>、NO及MDA含量，免疫組化檢測血管組織內皮細胞N

6、F-κB活性；RT-PCR法檢測肝組織中PON1mRNA表達水平。 結果： (1)HTL顯著抑制ACh引起的大鼠胸主動脈的EDR反應，但對硝普鈉引起的非內皮依賴性舒張反應無明顯影響，同時導致了大鼠血清NO水平、PGI<,2>的代謝產物6-keto-PGF<,1α>含量及SOD活性和PONl活性的降低，MDA濃度的增加、肝組織PON1mRNA表達下調、但對Ang Ⅱ含量無顯著性影響。HTL同時激活血管內皮細胞NF-κB活性

7、； (2)卡托普利在沒有顯著影響血清Ang Ⅱ含量的情況下，呈劑量依賴性地改善HTL損傷的大鼠胸主動脈的EDR反應，抑制血管內皮細胞NF-κB活性；同時降低血清中ACE活性與MDA的濃度、維持血清NO水平、SOD與PON1活性、增加6-keto-PGF<,1α>含量、促進PON1mRNA的表達。 結論：卡托普利對HTL所致大鼠血管內皮功能損傷具有保護作用。 第三章 HIL對體外培養(yǎng)的血管內皮細胞的損傷作用及卡托普

8、利的保護作用與機制探討 目的：用體外培養(yǎng)的內皮細胞探討卡托普利對HTL所致血管內皮細胞損傷的保護作用及機制。 方法：體外培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞，分別與不同濃度的HTL孵育，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測內皮細胞中TNF-α和sICAM-1的濃度，熒光顯微鏡檢測ROS的含量與NF-αB的激活，同時檢測內皮細胞活力、LDH漏出量與NO水平，IκB-α蛋白表達。 結果： (1)HTL(1mmol/L)孵育內

9、皮細胞3h后顯著增加細胞ROS含量，刺激了NF-κB的轉錄入胞核而活化，孵育細胞24h后明顯升高細胞上清液中sICAM-1和TNF-α濃度；降低細胞活力和NO的水平，增加LDH的漏出量。 (2)卡托普利 (0.03mmol/L)可顯著抑制HTL所致ROS含量的增加以及NF-κB的激活，這種作用可以被巰基抑制劑PHMB所阻斷，與NADPH氧化酶抑制劑Apocynin、NF-κB的抑制劑PDTC的效果相似；可抑制HTL刺激的培養(yǎng)液中