雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2的作用和作用機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　 雷公藤內(nèi)酯醇（Triptlide，TPL）是從衛(wèi)矛科雷公藤屬植物中提取出來(lái)的具有多種生物活性的小分子化合物，是雷公藤提取物中主要的活性成分，主要用于自身免疫性疾病及炎性疾病的治療。最近研究發(fā)現(xiàn) TPL對(duì)白血病、卵巢癌、腎癌等多種腫瘤均有很強(qiáng)的抑制作用，具有廣譜的抗腫瘤作用，其抗腫瘤作用主要與 caspase通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。肝癌是常見(jiàn)惡性腫瘤，其發(fā)病率居常見(jiàn)腫瘤第五位，死亡率僅次于胃癌和食管癌，而在我國(guó)僅次

2、于肺癌，是惡性腫瘤的第二致死原因。目前有關(guān) TPL對(duì)肝癌的作用研究較少，其作用及作用機(jī)制不清。
　　 研究目的：
　　 研究 TPL對(duì)肝癌細(xì)胞株 HepG2增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用及 HepG2中caspase-3、8、9與 PARP（聚 ADP核糖聚合酶）蛋白的表達(dá)變化情況，探討 TPL抗腫瘤作用及作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 以加培養(yǎng)基細(xì)胞為空白對(duì)照組，按預(yù)計(jì)量加入 TP

3、L，使 TPL終濃度為10、20、40、80nmol/L的 HepG2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組。分別收集培養(yǎng)24、48和72小時(shí) HepG2細(xì)胞，MTT法檢測(cè) TPL對(duì)細(xì)胞增殖的影響；收集培養(yǎng)24小時(shí) HepG2細(xì)胞，Hoechst熒光染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)變化，AnnexinV/PI流式細(xì)胞儀標(biāo)記法檢測(cè) TPL對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡作用的影響，Western blot檢測(cè) caspase-3、8、9與 PARP的表達(dá)情況。
　　 研究結(jié)果：<

4、br>　　 經(jīng) MTT檢測(cè)，10、20、40、80nmol/L濃度的 TPL作用24小時(shí) HepG2細(xì)胞的抑制率分別為15.2、22.5、34.9、40.7％；48小時(shí)抑制率分別為21.5、34.8、44.1、44.8％；72小時(shí)抑制率分別為31.6、47.2、51.6、56.0％；抑制作用呈時(shí)間和劑量的依賴性。TPL對(duì) HepG2的 IC50為38nmol/L。10、20、40、80nmol/L濃度的 TPL作用24小時(shí)的 HepG

5、2細(xì)胞，hoechst熒光染色顯微鏡下均出現(xiàn)明顯的凋亡細(xì)胞；AnnexinV/PI流式細(xì)胞儀檢測(cè)其凋亡率分別為8.89％、9.81％、14.69％、22.04％，對(duì)照組抑制率為7.35％，其凋亡率呈濃度依賴性；western blot結(jié)果顯示，其 caspase-3、9、PARP蛋白活化顯影，且均較對(duì)照組顯影增強(qiáng)，顯影強(qiáng)度隨 TPL濃度的增加而增強(qiáng)，未見(jiàn) caspase-8活化顯影。
　　 研究結(jié)論：
　　 TPL對(duì) H