骨髓CD34+干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：分離和培養(yǎng)犬骨髓CD34＋細(xì)胞，研究其向內(nèi)皮細(xì)胞分化的生物學(xué)特性，并種植于小口徑人工血管支架內(nèi)表面，觀察內(nèi)皮化效果。
　　 方法：⑴抽取犬骨髓，F(xiàn)icoll液分離單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)，免疫磁珠分離CD34＋細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞純度，DMEM液培養(yǎng)，內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)誘導(dǎo)分化，行CD31、vWF(Ⅷ因子)免疫熒光、免疫組織化學(xué)、Dil-Ac-LDL吸收實(shí)驗(yàn)、體外成血管實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞特性和功能。⑵將誘導(dǎo)的CD34

2、＋細(xì)胞種植于人工小血管支架內(nèi)表面，人工小血管置換一段犬頸動(dòng)脈，構(gòu)建動(dòng)物模型。掃描電鏡觀察細(xì)胞在人工血管腔面的分布和生長(zhǎng)情況。
　　 結(jié)果：①經(jīng)流式細(xì)胞儀測(cè)定，免疫磁珠方法分離的細(xì)胞中CD34＋細(xì)胞含量為 78.46±6.37[％]。經(jīng)免疫磁珠分離獲得的骨髓CD34＋細(xì)胞在倒置顯微鏡下為折光性強(qiáng)的圓形細(xì)胞，大小均一，24h后觀察開(kāi)始出現(xiàn)貼壁細(xì)胞，呈圓形，隨后逐漸伸出偽足，倒置顯微鏡下剛貼壁的細(xì)胞呈典型的“鵝卵石”狀，細(xì)胞形態(tài)逐漸演

3、變成梭型，兩周后細(xì)胞基本鋪滿(mǎn)培養(yǎng)瓶底面。②免疫熒光、免疫組織化學(xué)結(jié)果示CD31和vWF表達(dá)均為陽(yáng)性，Dil-Ac-LDL吸收功能實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，體外成血管實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，證明CD34＋被成功誘導(dǎo)向內(nèi)皮細(xì)胞分化。③掃描電鏡觀察分化的內(nèi)皮細(xì)胞在人工血管支架內(nèi)表面的種植情況，可見(jiàn)大量?jī)?nèi)皮細(xì)胞粘附于人工血管內(nèi)表面，細(xì)胞形態(tài)伸展，連續(xù)性較好，有偽足伸出并長(zhǎng)入血管內(nèi)表面微孔內(nèi)。
　　 結(jié)論：⑴免疫磁珠方法可分離得到高純度的骨髓CD34＋細(xì)胞，且CD34