HCMV感染致人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株miRNA表達(dá)改變的初步研究.pdf

1、目的:篩選人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞差異表達(dá)的miRNA，為進(jìn)一步研究HCMV的致畸機(jī)制提供基礎(chǔ)。
　　 方法:用HCMV(MOI=5)感染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株，感染后24h，48h，72h收獲細(xì)胞作為為實(shí)驗(yàn)組，以模擬感染的正常細(xì)胞為對照組。用miRNA表達(dá)譜芯片技術(shù)檢測細(xì)胞的miRNA表達(dá)水平，應(yīng)用軟件篩選并獲得一些差異表達(dá)明顯的miRNA，再利用Taqman

2、探針或SYBR綠色熒光染料Ⅰ(SYBRGREENⅠ)實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果，應(yīng)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測miRNA的靶基因，并篩選出與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有關(guān)的靶基因。
　　 結(jié)果:與模擬感染的細(xì)胞相比，24h.p.i，48h.p.i，72h.p.i實(shí)驗(yàn)組中有33個細(xì)胞miRNA表達(dá)顯著差異，其中19個表達(dá)上調(diào)均超過2倍，有hsa-miR-1275, hsa-miR-296-3p, hsa-miR-1246, hsa-miR-409-3p

3、等;14個表達(dá)下調(diào)超過2倍，有hsa-miR-634，hsa-miR-129-3p，hsa-miR-340*，hsa-miR-769-5p等。實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示:與芯片結(jié)果基本一致，hsa-miR-381，hsa-miR-622，hsa-miR-27b，hsa-miR-296-3p表達(dá)上調(diào)，hsa-miR-634表達(dá)顯著下調(diào)，可初步作為其特異基因。生物信息學(xué)結(jié)果表明:hsa-miR-381與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)的靶基因有10個，如R

4、OM1、SIAH1、JAK2等;hsa-miR-622的靶基因有4個，分別是BTK、PHOX2B、AQP8和PAX; hsa-miR-27b的靶基因有40個，如SYT-1、HOXB8、OTX2等;hsa-miR-296-3p的靶基因有7個，如GPR143、NOG、HOXB6等;hsa-miR-634的靶基因有4個，分別是NOTCH3、TYR、ACVR1和CELSR3;其他差異表達(dá)miRNA的靶基因還有NEROD1、AQP4、NRP2、S