金黃色葡萄球菌α-毒素對小鼠肺AQP1表達的影響.pdf

1、前言：水通道蛋白(Aquaporin，AQP)是一組水選擇通道的分子家族，對生命體內(nèi)水的轉運提供了快速的通道。在哺乳動物，水通道存在于許多組織和器官如：腦、腎、肺等。已知肺組織中有多種水通道蛋白表達，其中主要分布于肺微血管內(nèi)皮細胞(LMEC)的AQP1對維持肺水平衡發(fā)揮著重要作用。 目的：本實驗擬通過觀察金黃色葡萄球菌α-毒素(α-Toxin)對小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞AQP1表達的影響，為進一步研究肺水代謝異常的機制提供理論基礎及

2、實驗依據(jù)。 材料和方法取20只雄性Balb/c小鼠，隨機分成實驗組和對照組。實驗組給α-Toxin刺激因素后按6h、10h、24h三個時間點隨機分為三組：6h為α-Toxin6h組、10h為α-Toxin10h組以及24h為α-Toxin24h組。處死小鼠取材。對照組則給相等量NS后于10h處死取材。開胸灌流肺臟盡量把肺血沖凈后取肺：左肺制成蠟塊，用于HE染色及免疫組化染色。免疫組化染色采用SP法，按說明書操作。通過圖像分析系統(tǒng)

3、進行圖像采集、光密度掃描半定量分析，檢測AQP1在肺微血管內(nèi)皮細胞的表達。統(tǒng)計方法采用SPSSV11軟件包，根據(jù)數(shù)據(jù)特征進行多樣本的方差分析及方差分析的兩兩比較(LSD法)，所有結果采取p＜0.05為有統(tǒng)計學意義。 結果病理學改變α-Toxin各組肺泡間隔有不同程度的增寬，炎細胞浸潤，水腫，肺泡結構破壞。以α-Toxin10h組最為明顯。免疫組化染色AQP1主要存在于肺微血管內(nèi)皮細胞。AQP1的表達在α-Toxin各組均有不同程

4、度減少，以α-Toxin10h組最為明顯。經(jīng)方差分析p＜0.05,有顯著性差異。組間兩兩比較α-Toxin6h組與α-Toxin24h組p＞0.05無顯著性差異，其余各組比較p＜0.05有顯著性差異。 討論早期理論認為調節(jié)組織內(nèi)水代謝的途徑是透過血管內(nèi)皮或組織上皮的細胞連接間隙進行單純擴散。而近年來水通道蛋白的發(fā)現(xiàn)使人們對水代謝機制的認識產(chǎn)生了革命性的變化。目前已知肺組織中存在6種水通道蛋白，其中AQP1主要分布于肺微血管內(nèi)皮細

5、胞(LMEC)，在調節(jié)水代謝中發(fā)揮重要作用。有研究表明：AQP1敲除的小鼠肺泡一毛細血管間水的通透性較野生型降低了10倍。而且在新生小鼠肺臟內(nèi)液體大量吸收的關鍵時期AQP1表達大量增加。肺微血管是構成血氣屏障的重要結構。在各種炎癥損傷等引起的病理過程中LMEC通透性增加是發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。本研究結果顯示水通透性強弱與細胞膜上AQP1密度成正相關。α-Toxin刺激后的LEMC的AQP1表達下降明顯，從而導致水代謝障礙。隨著損傷的減弱，AQ