腺苷A1受體在癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用及其與GABA信號(hào)通路相關(guān)性的研究.pdf

1、第一部分腺苷A1受體對(duì)氯化鋰-匹魯卡品致癇后大鼠海馬神經(jīng)元損傷的作用及機(jī)制研究
　　目的:探討腺苷A1受體對(duì)氯化鋰-匹魯卡品致癇后海馬神經(jīng)元損傷的作用及可能機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常組,致癇組,致癇+腺苷A1受體阻斷劑(DPCPX)組,致癇+腺苷A1受體激動(dòng)劑(2-CAdo)組,采用氯化鋰-匹魯卡品點(diǎn)燃制作癲癇模型,其中正常組不做任何干預(yù),致癇+DPCPX組制作癲癇模型前后采用DPCPX干預(yù),致癇+2-CAdo組

2、制作癲癇模型前后采用2-CAdo干預(yù),每組分為1d、14d、30d三個(gè)時(shí)間點(diǎn),利用HE染色觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)學(xué)變化,采用TUNEL染色方法檢測(cè)海馬神經(jīng)元凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.正常組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元HE染色可見:神經(jīng)元排列整齊,輪廓清晰,胞核呈圓形或橢圓形,結(jié)構(gòu)完整。致癇組大鼠海馬CA3區(qū)HE染色可見:癲癇發(fā)作后1d細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常,排列欠整齊,部分神經(jīng)細(xì)胞腫脹、粗大,形態(tài)不完整;隨著癲癇發(fā)作時(shí)間延長(zhǎng),14d、

3、30d可見神經(jīng)元細(xì)胞排列紊亂,輪廓模糊,界限不清,胞核固縮,胞體皺縮,胞漿空泡,失去正常結(jié)構(gòu),出現(xiàn)明顯神經(jīng)元變性,壞死。
　　2.同一時(shí)間點(diǎn),與致癇組相比,致癇+DPCPX組海馬CA3區(qū)HE染色可見:神經(jīng)元細(xì)胞排列更加紊亂,細(xì)胞水腫、胞漿空泡、神經(jīng)元變性壞死等結(jié)構(gòu)損害程度加重;致癇+2-CAdo組海馬CA3區(qū)HE染色可見:細(xì)胞排列基本規(guī)整,細(xì)胞水腫、胞漿空泡、神經(jīng)元變性壞死等結(jié)構(gòu)損害程度減輕。
　　3.大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元

4、TUNEL檢測(cè)可見:正常組1d、14d、30d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬神經(jīng)元凋亡指數(shù)無(wú)明顯差異(p>0.05)。同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi),致癇組與正常組相比,出現(xiàn)明顯神經(jīng)元凋亡,凋亡指數(shù)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01);與致癇組相比,致癇+DPCPX組神經(jīng)元凋亡增加,凋亡指數(shù)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01);致癇+2-CAdo組神經(jīng)元凋亡減少,凋亡指數(shù)明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.腺苷

5、A1受體能夠減輕細(xì)胞水腫,降低神經(jīng)元凋亡。
　　2.腺苷A1受體對(duì)氯化鋰-匹魯卡品致癇后海馬神經(jīng)元損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　第二部分腺苷A1受體抗癲癇作用與GABA信號(hào)通路相關(guān)性的研究
　　目的:探討腺苷A1受體對(duì)GABA信號(hào)通路的影響及其抗癲癇作用機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常組,致癇組,致癇+腺苷A1受體阻斷劑(DPCPX)組,致癇+腺苷A1受體激動(dòng)劑(2-CAdo)組,采用氯化鋰-匹魯卡品點(diǎn)燃制作

6、癲癇模型,其中正常組不做任何干預(yù),致癇+DPCPX組制作癲癇模型前后采用DPCPX干預(yù),致癇+2-CAdo組制作癲癇模型前后采用2-CAdo干預(yù),每組分為1d、14d、30d三個(gè)時(shí)間點(diǎn),利用免疫組化方法觀察海馬γ-氨基丁酸受體表達(dá)水平的變化,采用Westernblotting檢測(cè)谷氨酸脫羧酶、γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶及γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1.GABA受體的表達(dá):正常組大鼠海馬1d、14d、30d三個(gè)

7、時(shí)間點(diǎn)GABA(A)與GABA(B)受體表達(dá)水平無(wú)明顯差異;同一時(shí)間點(diǎn)致癇組GABA(A)與GABA(B)受體表達(dá)水平較正常組減少(p<0.05)。同一時(shí)間點(diǎn),與致癇組相比,致癇+DPCPX組GABA(A)與GABA(B)受體表達(dá)水平明顯減少(p<0.05);致癇+2-CAdo組GABA(A)與GABA(B)受體表達(dá)水平明顯增加(p<0.05)。
　　2.GAD的表達(dá):正常組1d、14d、30d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)GAD表達(dá)水平無(wú)明顯差異。

8、同一時(shí)間點(diǎn),與正常組相比,致癇組GAD表達(dá)水平下調(diào),兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。同一時(shí)間點(diǎn),與致癇組相比,致癇+DPCPX組GAD表達(dá)水平下調(diào),兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);致癇+2-CAdo組GAD表達(dá)水平上調(diào),兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　3.GABA-T的表達(dá):正常組1d、14d、30d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)GABA-T表達(dá)水平無(wú)明顯差異。與正常組相比,致癇組1d、14d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)GAB

9、A-T表達(dá)水平無(wú)明顯差異,30d時(shí)間點(diǎn)GABA-T表達(dá)水平上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與致癇組相比,致癇+DPCPX組1d時(shí)間點(diǎn),GABA-T表達(dá)水平兩者之間無(wú)明顯差異;14d、30d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),GABA-T表達(dá)水平上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);致癇+2-CAdo組1d時(shí)間點(diǎn),GABA-T表達(dá)水平兩者之間無(wú)明顯差異;14d、30d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),GABA-T表達(dá)水平下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。

10、　　4.GAT-1與GAT-3的表達(dá):正常組1d、14d、30d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)GAT-1與GAT-3表達(dá)水平無(wú)明顯差異。同一時(shí)間點(diǎn),致癇組與正常組相比,GAT-1與GAT-3表達(dá)水平下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。同一時(shí)間點(diǎn),致癇+DPCPX組與致癇組相比,GAT-1與GAT-3表達(dá)水平上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與致癇組相比,致癇+2-CAdo組1d、14d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),GAT-1與GAT-3表達(dá)水平下調(diào),差異具有統(tǒng)