未成熟樹突狀細胞局部回輸治療誘導同種異體復合組織移植耐受的研究.pdf

1、近年來,隨著新型免疫抑制藥物的問世及組織配型技術的精進,移植外科發(fā)展迅猛,整形外科醫(yī)生也加強了在異體復合組織移植領域的探索。然而,CTA移植的發(fā)展遠遠滯后于內(nèi)臟器官移植,究其根本,是因為其組分復雜,抗原性不均一。自1998年Dubernard首次成功實施手移植以來,截止07年全球已完成20例手移植,8例換臉。據(jù)文獻回顧,法國的第一例CTA受者在術后發(fā)生過2次急性排斥反應,本研究所實施的第二例患者也發(fā)生了3次急排。在加大免疫抑制劑用量后,

2、排斥反應均得到控制,但代價卻是各種棘手的并發(fā)癥,急性腎衰、高血壓癥、高血糖、白細胞減少癥等等。因此,如何最小化免疫抑制劑應用的風險,已成為CTA移植領域的重中之重。異體復合組織移植排斥反應的發(fā)生遵循著免疫應答的一般規(guī)律,即首先對外來的同種異體抗原進行免疫識別,繼而進入活化階段,最終產(chǎn)生對移植物的免疫排斥,因此,選擇性阻斷其中任一環(huán)節(jié),均有可能誘導移植免疫耐受。樹突狀細胞是最主要的抗原提呈細胞,其表面高水平表達MHC-II類分子以及共刺激

3、分子CD80、CD86,通過第二信號刺激途徑,激活初始T細胞。但是在它成熟之前,這些分子呈低表達,以吞噬功能為主,提呈功能為輔,甚至可以誘導T細胞凋亡或者無能。因此,未成熟樹突狀細胞是細胞回輸治療方案理想的備選細胞。
　　目的:利用CTA移植物位于體表,耐缺血時間長的優(yōu)勢,利用術中、術后兩個時間窗,提出局部細胞治療誘導免疫耐受的新理念,降低全身免疫抑制劑應用為同種異體復合組織移植帶來的風險。
　　方法:1.貼壁培養(yǎng)法體外誘導

4、未成熟樹突狀細胞,進行形態(tài)學鑒定、活性及表型鑒定,最后通過體外鑒定其免疫學功能。2.體內(nèi)試驗分別研究供、受雙方來源的imDC,局部回輸或聯(lián)合應用低劑量雷帕霉素對異體皮瓣存活的影響。
　　結果:1.光鏡可見細胞呈葡萄串樣生長,電鏡下可看到細胞表面皺褶多、短刺狀突起少,胞內(nèi)可見豐富的細胞器及吞噬泡?；罴毎?91.13±1.25)％,純度(61.10±1.47)％,OX62陽性細胞表面CD80、86、MHC II呈低表達。抑制功能試驗

5、表明imDC不具備直接刺激T細胞活化擴增的能力。單向混合淋巴細胞反應,觀察到imDC下調了T細胞活化擴增的能力。2.供體imDC回輸組最先發(fā)生急排,病理分析符合急排的病理特點。受體imDC回輸聯(lián)合低劑量雷帕霉素用藥后,皮瓣成活期延長至20余天,較雷帕霉素單獨處理組長,病理分析見皮膚、皮下以及血管周圍組織炎性細胞浸潤均明顯增多。排斥終點各組受鼠脾臟、淋巴結內(nèi)Treg含量檢測,供體imDC回輸組最低,受體imDC回輸聯(lián)合雷帕霉素組最高,但均