姜黃素對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷后NF-κB和Hsp70的表達(dá)研究.pdf

1、目的：為探討姜黃素對(duì)缺血再灌注損傷的作用機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型,觀察姜黃素對(duì)脊髓組織損傷后的作用,并用不同的方法檢測(cè)NF-κB和Hsp70的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，將有助于從分子水平上更有效的尋求缺血再灌注損傷的治療靶點(diǎn)，為臨床治療脊髓損傷提供新的思路。
　　方法:將72只雄性SD大鼠隨機(jī)分為姜黃素實(shí)驗(yàn)組、缺血模型組和正常對(duì)照組,每組24只,水合氯醛0.3mg/kg腹腔麻醉后,仰臥于工作臺(tái),無(wú)菌下腹正中縱行打開(kāi)腹腔,暴

2、露腹主動(dòng)脈,辨認(rèn)雙側(cè)腎動(dòng)脈,前兩組經(jīng)夾閉左右腎動(dòng)脈之間腹主動(dòng)脈制作脊髓缺血再灌注損傷模型；對(duì)照組不做任何處理。實(shí)驗(yàn)組缺血前10min舌下靜脈注射20mg/kg姜黃素；模型組缺血前10min舌下靜脈注射同等量生理鹽水；對(duì)照組經(jīng)舌下靜脈注射等量的生理鹽水。再灌注3、12、24、72h不同時(shí)間點(diǎn)各取6只大鼠腰段脊髓組織,分別經(jīng)HE染色、免疫組織化學(xué)法和Westernblot法檢測(cè)NF-κB和Hsp70的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、大鼠脊髓組織

3、學(xué)改變
　　1.1HE染色觀察正常對(duì)照組:神經(jīng)細(xì)胞輪廓清晰,核仁清楚，胞漿均勻深染,整個(gè)組織結(jié)構(gòu)完整、清楚。缺血模型組:再灌注3h可見(jiàn)部分神經(jīng)細(xì)胞腫脹,核仁不清。再灌注12h可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞輪廓不清,核皺縮,胞漿中可見(jiàn)空泡變性。再灌注24h灰質(zhì)區(qū)大部分神經(jīng)元變性壞死,胞漿中可見(jiàn)廣泛空泡形成。再灌注72h可見(jiàn)灰質(zhì)結(jié)構(gòu)混亂,膠質(zhì)細(xì)胞增生,可見(jiàn)出血灶。姜黃素實(shí)驗(yàn)組：再灌注3h,神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰,核仁清楚,組織輕度水腫。再灌注12h可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞

4、輕度腫脹,部分神經(jīng)元核仁不清。再灌注24h、72h組織病理學(xué)改變較模型組明顯見(jiàn)好,組織腫脹減輕,可見(jiàn)灰質(zhì)區(qū)部分神經(jīng)元變性、少量空泡化。
　　1.2免疫組化檢測(cè)NF-κBp65的表達(dá):各組脊髓組織NF-κBp65均有表達(dá),模型組再灌注后3h可見(jiàn)其表達(dá)開(kāi)始增多,24h明顯增多且相對(duì)達(dá)高峰（P<0.01）,72h逐漸下降。而姜黃素實(shí)驗(yàn)組NF-κBp65表達(dá)在相同時(shí)間點(diǎn)呈中度增多（P<0.05），但仍高于對(duì)照組的表達(dá)。
　　1.3免

5、疫組化檢測(cè)Hsp70的表達(dá):各組脊髓組織Hsp70均有表達(dá),模型組再灌注后3h可見(jiàn)其表達(dá)開(kāi)始增多,隨時(shí)間延長(zhǎng)呈逐漸上升趨勢(shì)，24h明顯增多達(dá)高峰（P<0.05）。而姜黃素實(shí)驗(yàn)組Hsp70表達(dá)在相同時(shí)間點(diǎn)呈中度增多（P<0.05），但仍高于對(duì)照組的表達(dá)。
　　2、Westernblot法檢測(cè)NF-κB和Hsp70的表達(dá)
　　在姜黃素實(shí)驗(yàn)組和模型組中，大鼠脊髓組織于缺血再灌注后NF-κB和Hsp70蛋白在相同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)表達(dá)趨勢(shì)基本

6、一致。實(shí)驗(yàn)組3hNF-κB和Hsp70蛋白開(kāi)始增加（P<0.05與對(duì)照組NC比較）,并隨時(shí)間的延長(zhǎng)其蛋白表達(dá)水平相應(yīng)性升高，12h明顯增多（P<0.01），24h達(dá)高峰（P<0.05）,72h逐漸減少。正常對(duì)照組僅有少量的NF-κB和Hsp70蛋白表達(dá)。
　　3、結(jié)果表明,與模型組相比，脊髓組織病理學(xué)檢查示：姜黃素實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)細(xì)胞損傷相對(duì)較輕。再灌注損傷后相同的時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組中NF–κB的表達(dá)相對(duì)較低,而Hsp70的表達(dá)相對(duì)較高，其差

7、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這表明姜黃素預(yù)處理對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。同時(shí)也觀察到缺血再灌注后隨著時(shí)間延長(zhǎng)NF-κB和Hsp70的表達(dá)逐漸升高,多于24h時(shí)達(dá)高峰。
　　結(jié)論：1、大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型，是目前臨床上模擬缺血再灌注損傷的一種較為理想的動(dòng)物模型。
　　2、脊髓缺血再灌注損傷后可致組織發(fā)生一系列炎性改變，同時(shí)上調(diào)NF-κB和Hsp70的表達(dá)，可能對(duì)脊髓組織在應(yīng)激方面起了重要的保護(hù)角色。