結(jié)腸癌血管生成擬態(tài)的形態(tài)學(xué)觀察及生成機(jī)制.pdf

1、目的:探討結(jié)腸癌血管生成擬態(tài)(VM)現(xiàn)象及其生成的相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:體外三維培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480,倒置顯微鏡下觀察VM形成情況,透射電鏡下觀察其超微結(jié)構(gòu)。采用MTT法檢測(cè)磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)信號(hào)通路抑制劑2-(4-嗎啉基)-8-苯基-4氫-1-苯并吡喃-4-酮(LY294002)對(duì)SW480細(xì)胞的增殖抑制率。10μmol/L LY294002處理SW480細(xì)胞72 h,在光學(xué)顯微鏡下觀察VM密度,并用逆轉(zhuǎn)

2、錄聚合酶鏈技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)骨橋蛋白(OPN)基因,基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)基因的水平。Western Blot法檢測(cè)10μmol/L LY294002處理SW480細(xì)胞24～72 h后蛋白激酶B(PKB),磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480在體外三維培養(yǎng)條件下能夠形成VM,電鏡觀察結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了VM的存在。LY294002作用后SW480細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯減慢,抑制率為13.

3、01％～67.55％(P<0.01)且呈良好的時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系。SW480細(xì)胞經(jīng)10μmol/L LY294002干預(yù)72 h后,VM密度由12.50±3.27下降至2.60±1.07(P<0.01),opn,mmp2mRNA的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.31±0.01,0.20±0.04,低于未干預(yù)細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度0.75±0.03,0.55±0.05(P<0.01)。10μmol/L LY294002處理SW480細(xì)胞24～72 h后,PKB