應用自身抗體篩選和鑒定乳腺腫瘤相關抗原.pdf

1、目前應用于乳腺癌檢測的腫瘤標志物只有有限的幾個，不但敏感性和特異性都不高，而且對乳腺癌早期檢測都沒有很好的效果。應用自身抗體技術篩選得到的乳腺腫瘤相關蛋白不僅有助于提高乳腺癌檢測的敏感性和特異性，還能在很大程度上填補乳腺癌早期檢測的空白。
　　 方法：
　　 運用生物淘洗富集技術，用正常人和乳腺癌病人血清從一個乳腺癌cDNA T7噬菌體文庫中篩選腫瘤相關蛋白。經生物淘洗，用噬菌斑轉印分析和免疫化學檢測方法得到腫瘤相關蛋白

2、。再用PCR和測序的方法分析這些潛在的腫瘤相關噬菌體克隆，尋找在開放閱讀框架內的序列，通過BLAST比對識別出這些噬菌體表達蛋白。后用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）的方法對87個乳腺癌病人和87個正常人血清樣品，檢測每一個開放閱讀框架內的噬菌體表達蛋白的自身抗體。為評估單個標志物和多標志物聯(lián)合診斷的準確率，使用了邏輯回歸模型和留一交叉驗證方法。最后又從實驗室保存的經四輪生物淘洗后的肺癌cDNA T7噬菌體文庫中用同樣的方法篩選、鑒定和分析乳

3、腺癌相關蛋白。
　　 結果：
　　 淘洗富集后我們得到了100個乳腺腫瘤相關噬菌體克隆，序列分析表明其中6個不同的噬菌體表達蛋白在閱讀框架之內。BLAST比對結果與ASB-9，SERAC-1和RELT這3個蛋白最為匹配。應用自身抗體，對這6個噬菌體表達蛋白的ELISA分析結果顯示，其中3個克隆在統(tǒng)計學上能顯著區(qū)分出病人和正常人。用87份乳腺癌病人血清和87份正常人血清對這3個噬菌體表達蛋白進行驗證，邏輯回歸模型聯(lián)合檢測的

4、敏感性達到80％，特異性達到100％；留一交叉驗證3者聯(lián)合的預測值敏感性和特異性分別達到76.5％和82.4％。后從肺癌文庫中篩選得到了43個乳腺腫瘤相關噬菌體克隆，經PCR挑出電泳條帶明顯不一樣的10個產物去測序。測序結果通過NCBI核酸數據庫比對得到2條開放閱讀框架內蛋白序列信息。應用自身抗體，對表達HSPA4L和RINT-1這兩個蛋白噬菌體的ELISA分析結果顯示，這2個克隆在統(tǒng)計學上能顯著區(qū)分出病人和正常人。隨機選取87份乳腺癌

5、病人血清和87份正常人血清對這兩個噬菌體表達蛋白進行驗證，邏輯回歸模型聯(lián)合檢測的敏感性達到94％，特異性達到100％；留一交叉驗證兩者聯(lián)合的預測值敏感性和特異性分別達到84.5％和95％。ROC曲線分析和留一法都表明多個標志物聯(lián)合檢測的價值要高于單標志物，意示著多標志物聯(lián)合在診斷中的重要性。
　　 結論：
　　 對乳腺癌來說，血清自身抗體是其早期檢測和診斷的一種有效方法，而且多抗體聯(lián)合應用可實現更高的診斷準確率。下一步就